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磺胺类药物残留分析技术(三)

[db:作者] / 2022-12-07 00:00

(2)净化方法

  

SAs常用的净化方法主要有液液分配法(LLP)、固相萃取法(SPE)、QuEChERS、分子印迹技术(MIP)、免疫亲和色谱法(IAC)及在线自动净化法等。

  

1)液液分配(liquid liquid partition,LLP)

  

LLP通过分析物在互不相溶的两相中的溶解度和分配系数的不同,达到将分析物和杂质分离的目的。LLP时容易产生乳化现象,在提取时应当注意振荡速度,按“缓-快-缓”进行操作,同时,在LLP时常加入无水硫酸钠以提高回收率,并减少杂质的浸出。Potter等建立了一种快速分析鱼组织中17种Sas和2种磺胺增效剂的LC-MS/MS方法。分析物用乙腈-水(50+50,v/v)提取,离心,先加入正己烷LLP净化除脂,再加入氯仿LLP提取净化,蒸干,复溶后进样检测。该方法LOD在0.1~0.9ng/g之间,回收率在30%~100%之间,RSD在4%~23%之间。徐维海等建立了HPLC法同时分离并检测鱼、虾等水产品中14种SAs。样品经无水硫酸钠脱水后,乙腈提取药物,再用乙腈饱和正己烷LLP脱脂净化,HPLC检测。该方法的LOD为0.01~0.02mg/kg,样品的加标回收率为66%~92%。Stoev等建立了肉和肾脏中10种常用SAs的HPLC-FLD定量分析方法。先用乙酸乙酯提取,用丙酮再提取一次,蒸干后,用水-二氯甲烷LLP净化3次,有机相蒸干复溶后,进HPLC测定。在1μg/kg、5ug/kg、10ug/kg添加浓度,方法平均回收率分别为64%、68%和75%,LOQ为0.5~1μg/kg。

  

2)固相萃取(solid phase extraction,SPE)

  

SPE利用吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,使其与样品基体、干扰物质分离,然后通过洗脱液洗脱或加热解吸附,分离和富集目标物。与传统的LLP相比,SPE不需要大量有机溶剂,不产生乳化现象,可净化很小体积的样品,是目前兽药残留分析中样品前处理的主流技术。动物源食品中SAs净化可以用的SPE填料类型较多,包括正相柱(硅胶柱、硅藻土柱、碱性氧化铝柱)、反相柱(C18柱、HLB柱)和离子交换柱(阳离子交换柱、阴离子交换柱),另外,还可联合用柱。

  

A.硅胶柱

  

Alaburda等引建立了牛奶中STZ、SMZ和SDM的残留检测方法。采用二氯甲烷提取,硅胶固相苯取柱净化,提取物经荧光胺衍生化后,用反相HPLC-FLD检测。方法LOD为0.3μg/L,STZ和SMZ的LOQ为1μgL,SDM为2.5μg/L,变异系数(CV)为4.4%~6.6%,STZ、SMZ和SDM的平均回收率分别为63.2%、91.2%和63.2%。Shao等测定猪肉、猪肝、猪肾中17种SAs时用无水硫酸钠除水,乙腈提取,正己烷除脂,提取液蒸干后,氯仿-正己烷(1+9,v/v)复溶,Sep-Pak硅胶柱(正己烷活化)净化,依次用甲醇-丙酮(1+1,v/v)和丙酮洗脱分析物,LC-MS/MS检测。方法回收率在52%~120%之间,LOD在0.01~1.0ug/kg之间。董丹等采用类似技术建立了鸡肉中17种SAs残留量的LC-MS/MS测定方法。样品经过匀浆、乙腈提取、正己烷脱脂、硅胶SPE柱净化后进行LC-MS/MS分析。以稳定同位素C-磺胺二甲基嘧啶作为内标,采用多反应监测(MRM)定量。方法LOD为0.02~1ug/kg,17种SAs的加标回收率为52.3%~124.9%,RSD为1.0%~17.6%。

  

B.碱性氧化铝柱

  

李俊锁等建立了鸡肝组织中中7种SAs的HPLC方法。样品加入无水硫酸钠后用乙腈提取,正己烷LLP脱脂和碱性氧化铝SPE柱净化,乙腈-水(75+25,v/v)洗脱,HPLC测定。在0.05~0.5mg/kg添加浓度范围内,该方法回收率在68.8%~100.0%之间,CV在1.3%~12%之间:LOD为0.01~0.03mg/kg,LOQ低于0.05mg/kg。我国农业部标准《动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法》中组织样品经乙腈提取,正已烷LLP分配,提取液浓缩至近干,用3mL乙腈。水(95+5,v/v)溶解残留物,再过碱性氧化铝SPE柱,吹干,用5mL乙腈-水(75+25,v/v)洗脱,用0.017mol/L磷酸定容至10mL,过0.45um微孔滤膜后,进HPLC测定。该方法在鸡肌肉和肝脏组织中的LOD为10~20ug/kg,回收率在80.9%~100.4%之间,室内CV为10.2%,室间CV为18.5%。

  

C.弗罗里硅土柱

  

Granja等建立了蜂蜜中ST、SM2和SDM的残留分析方法。蜂蜜样品采用30% NaCl溶解,再用二氯甲烷LLE提取,用弗罗里硅土SPE柱净化,HPLC检测,磺胺吡啶作为内标定量。ST、SM2和SDM的LOD分别为3ug/kg、4ug/kg、5ug/kg;在100ug/kg添加水平,ST、SM2和SDM的平均回收率分别为61.0%、94.5%和86.0%。

  

D. C18柱

  

de la Cruz等采用LC-MS/MS检测鸡蛋中的SDM、SMZ、SQXNa、SAM、SCP、SMR、SMTZ、SMXZ、STZ和SMPD等10种SAs。以SDZ为内标,乙腈提取后旋蒸至1mL,再用乙腈和水预处理的C18 SPE柱净化,乙洗脱,蒸干复溶后,用LC-MS/MS测定。该方法回收率为87%~116%,RSD为8.5%~27.2%;CCa在101.0~122.1ng/g之间,CCp在114.5~138.8ng/g之间。Heller等的同时建立鸡蛋中15种SAs的HPLC-UVD和LC-离子阱质谱(MSn)分析方法。样品用乙腈提取,经C18 SPE柱净化后,用HPLC和LC-MS2测定。该方法的确证浓度可以达到5~10ng/g,HPLC的定量范围在50~200ppb之间。Krivohlavek等建立了一种快速分析蜂蜜中11种SAs的残留检测方法。蜂蜜样品经匀浆提取,用C18 SPE柱净化后,采用LC-MS测定,方法LOD可达到25ug/kg。Zou 等建立了猪肉、猪肝、鸡肉、牛肉中12种SAs的HPLC方法。组织样品用乙腈提取,经9-芴基甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)衍生化后,过C18 SPE柱净化,HPLC紫外检测器(UVD)测定。方法添加回收率在70%以上,RSD低于13.7%,LOD在3~5ug/kg之间。

  

E.HLB柱

  

郭根和等采用HLB柱净化了对虾样品中的5种SAs。样品用二氯甲烷提取,氮气吹干后用3mL磷酸盐缓冲液-乙腈(95+5,v/v)复溶,过HLB柱净化,5mL甲醇洗脱,HPLC-UVD检测。方法LOD达到2ug/kg,相关系数在0.9997以上:在100ugkg、50ug/kg、10μg/kg三个添加水平,方法回收率在71%~90%之间,RSD<10%。Li等开发了虾中18种兽药(包括SQX等SAs)的LC-MSn分析方法。均质后的样品用5%三氯乙酸提取,提取液用HLBSPE柱净化,LC-MSn测定,SAs的确证浓度在10~20ng/g之间。Vargas Mamani等建立了牛奶中SM2、SQX和SMZ的残留分析方法。样品经蛋白沉降后,用HLBSPE柱净化,采用HPLC-DAD测定,方法LOQ均低于药物的MRL。