12.1.4.2 测定方法

TCs的残留测定方法已有大量文献报道，主要有微生物检测法、免疫分析法、薄层色谱法、毛细管电泳法、液相色谱法、液相色谱-质谱法等。目前，一些新兴的检测技术，如传感器技术、流动注射法、表面等离子共振技术等也开始在TCs残留分析中应用。

(1) 微生物法(microbiological analysis)

微生物法是测定抗生素的基本分析方法，其优点在于不需要复杂的样品前处理、不需要精密仪器、操作简便和检测费用低廉等，适用于大量样品的筛选，缺点是特异性较差，且不能用于定量检测。常用于TCs测定的是蜡状芽孢杆菌(ATCC11778)，其对CTC的灵敏度为0.005mg/L，对CTC和OTC的灵敏度均为0.025mg/L，对MNC的灵敏度均为0.001～0.002mg/L。

林修光等建立了用标准纸片法快速测定鸡肉中TCs残留量的微生物检测方法。准确称取鸡肉样品10.0g，加入20mL磷酸盐缓冲液(pH4.5)，3000～4000r/min均质2min，静置10min以上，4000r/min离心10min，取上清液检验。未出现抑菌圈者则判为TCs抗生素阴性，检验液与0.05mg/kg标准溶液如同样产生10mm以上明显的抑菌圈时，需进行加热确认试验。取两支试管分别加入检验液、0.2mg/kg TCs标准稀释液各4mL，置于沸水浴中加热30min，取两个试验平m分别放置纸片为加热检验液、加热的0.2mg/kg TCs标准稀释液、未加热的检验液、未加热的0.2mg/kg标准稀释液等四种溶液后，置于35℃孵育17h观察结果，未加热的检验液和0.2mg/kg标准稀释液出现正常的抑菌圈，加热的检验液和0.2mg/kg标准稀释液不出现抑菌圈，可判为TCs抗生素阳性。该方法的灵敏度为0.05mg/kg。DeWasch等采用微生物抑制测试筛选检测猪肉和鸡肉中的TCs残留。冻猪肉和鸡肉块用接种枯草芽孢杆菌的培养基(pH6)筛选。Mwangi等采用蜡样芽孢杆菌琼脂扩散方法，选用三个中等pH和两种家禽器官进行微生物检测，确定OTC的LOD，并评价其能否在MRLs水平可靠地检测家禽组织的OTC。LOD受生长介质的pH和抗生素浓度的影响，在低pH下，检测到肝脏和肾脏样品中OTC的抑制区显著增加，检测结果均低于MRLs(肾脏600ng/g，肝脏1200ng/g)。蜡状芽孢杆菌板在pH7的条件下能有效地对OTC进行常规筛查，在肝脏和肾脏中的LOD分别为131.3ng/mL和33.4ng/mL。