19.1.4.2 测定方法

与其他药物的测定方法相比，硫脲嘧啶类药物的检测方法并不多。从发表和公布的方法来看，主要经历了从称重法、化学比色法、分光光度法到色谱方法，再到色-质联用方法的发展阶段。

(1)称重法

最早采用间接测定方法，即利用甲状腺的组织学和重量变化来判断是否使用了硫脲嘧啶类药物。组织学研究发现，使用了硫脲嘧啶类药物的动物在形态上会发生一定的变化，主要是甲状腺、肌肉组织和胃肠束中水分含量的明显增加，导致上述器官的体积和重量的增加。研究表明，牛甲状腺重量的异常增加与使用了硫脲嘧啶类药物有关，超过60g即表明可疑。实际生产中，常常利用对比甲状腺重量的方法来判断是否使用了硫脲嘧啶类药物。到目前为止，甲状腺称重法是监测屠宰牛是否非法使用了硫脲嘧啶类药物最快、最便宜和最有效的手段。然而，利用该方法快速判断存在较高的假阳性。

(2)比色法(colorimetry)

比色法主要利用巯基或者硫酮基团与特异性化学试剂反应，产生显色反应来测定硫脲嘧啶类药物。Chesley建立了血液中硫脲类化合物的化学比色法。用2/3N的钨酸沉淀蛋白，滤液与显色试剂(含硝基铁钠、盐酸羟胺、碳酸氢钠、溴、苯酚)反应，反应生成物在580mμ处用光度计检测。在浓度范围0.4～4mg/100mL时，硫脲类化合物浓度与反应生成物的光强度呈线性相关。van Genderen等以此建立了动物组织和血液中甲基硫脲嘧啶的比色检测方法。用含20%乙醇的氯仿或二氯甲烷提取，再用酸溶液LLP净化，用Grote试剂比色检测。Beheshti等开发了分光光度法测定了动物组织中的硫脲嘧啶和巯基苯并咪唑，并将偏最小二乘(PLS)和主成分回归(PCR)应用于数据分析。浓度模型基于25个不同的硫脲嘧啶和巯基苯并咪唑混合物在200～350nm的吸收光谱建立。硫脲嘧啶和巯基苯并咪唑分别在1.5～15ug/mL和1～10ug/mL呈线性相关。

(3)流动注射法(flow injection，FI)

Economou等扩展了化学比色法的范畴，利用甲巯咪唑和卡比马唑可以抑制Cu(II)催化的发光氨与过氧化氢之间的化学发光反应，开发了流动注射-化学发光检测(FI-CL)(图19-14)。通过在线诱导化学发光反应，样品注入后产生负峰，峰的高度与样品中的药物浓度成比例。该方法甲巯咪唑的线性范围为2～100mg/L，卡比马唑为3～120mg/L；回收率为100%±4%，甲巯咪唑的RSD为1.9%，卡比马唑为2.1%。该类方法简单、快速，但反应受干扰较大，灵敏度不高。

图19-14 硫脲嘧啶 类药物的FI-CL检测示意图
R：H2O；R2：10mg/L Cu(II) in 3mmol/L H2SO4；R3：2mmol/L 过氧化氢：R4：2mmol/L发光氨in 0.05 mol/L NaOH：P：蠕动泵：IV：进样体积：S：样品：RC：反应管：D：检测器；W：废物

另外，Guzman等采用流动注射-碳纤维微电极安培检测器测定了饲料中的甲基硫脲嘧啶、硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶。该方法回收率高于80%，甲基硫脲嘧啶的LOD为2.6×10-7 mol/L。

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