由于微生物广泛存在于环境中，从预防交叉污染的角度出发，微生物实验必须遵循无菌操作的原则，采用多种物理、化学或是生物的方法，确保所有的物品和工作环境符合使用要求。常用以下术语表示杀灭微生物的程度。

消毒：杀灭或(和)清除致病微生物，使其数量减少到不再能引起人发病。用于消毒的化学药品称为消毒剂。

灭菌：将所有微生物全部杀灭或(和)清除掉，包括细菌芽孢和非致病微生物。灭菌比消毒更彻底。

无菌：不含活菌，是灭菌的结果。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术称为无菌操作。

(一)常用的灭菌、消毒方法

常用的灭菌或消毒方法分为4类：热力灭菌法、化学消毒法、辐射法和过滤除菌法。一般根据物品的种类和污染后的危害程度来选择消毒、灭菌方法。消毒首选物理方法，不能用物理方法消毒的方可选化学方法。

1.热力灭菌法 高温对微生物具有明显的杀伤作用，这是由于热能可变性蛋白质、核酸及破坏细胞膜等。热力灭菌法根据有无水蒸气的参与分为干热灭菌法和湿热灭菌法两种。热力灭菌法的种类及使用范围详见表4-4。

表4-4 热力灭菌法的种类及使用范围

2.化学消毒法 很多化学药物能够影响微生物的物理结构和生理活动，从而达到消毒的作用。化学消毒剂一般都对人体组织有害，因此，只能外用或用于环境的消毒，常用化学消毒剂的种类、作用机理及使用范围见表4-5。

表4-5 化学消毒剂及使用范围

3.辐射法 辐射法中紫外线杀菌最为常用。紫外线的穿透能力很弱，容易被固形物吸收，不能透过普通玻璃，因此，它只适用于空气、水及物体表面的杀菌。无菌室、超净工作台、生物安全柜内都装有紫外灯，用来进行空气消毒，消毒时间一般为30min。应用紫外线杀菌时，必须防止紫外线对人体的直接照射，以免伤害眼睛和灼伤皮肤。

4.过滤除菌法指将含菌的液体或气体通过一个称作细菌滤器的装置，使细菌受到机械的阻力而留在滤器或滤板上，从而达到除菌的目的。此法常用于不宜加热灭菌的液体物质，如培养基添加剂、抗生素、血清等。它的最大优点是不破坏液体中各种物质的化学成分，但是比细菌还小的病毒、支原体等无法被去除。超净工作台也是根据过滤除菌法的原理设计的。

(二)效果监测

实验室必须对消毒、灭菌效果定期进行监测。

1.高压蒸汽灭菌效果监测高压蒸汽灭菌应进行工艺监测、化学监测和生物监测。工艺监测应每锅进行，并详细记录。化学监测应每包进行，常用3M灭菌指示胶带。此胶带上印有斜行白色指示线条图案，贴在待灭菌的物体表面，在121℃经20min后胶带100%变色(条纹图案变为黑色斜条)。生物监测应每月进行，新灭菌器使用前必须先进行生物监测，合格后方可使用。生物指示剂有芽孢悬液、芽孢菌片以及菌片与培养基混装的指示管。灭菌后，取出生物指示剂接种于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，置于55～60℃温箱中培养2～7d，若培养后颜色未变，澄清透明，说明芽孢已被杀灭，达到了灭菌要求。

2.紫外线消毒效果监测紫外线消毒应进行灯管照射强度监测和生物监测。灯管照射强度监测每半年进行一次，30W的辐射照度值应不低于70μW/cm2。新使用的灯管也要进行监测，不得低于100μW/cm2。生物监测必要时进行，要求经消毒后的物品或空气中的自然菌应减少90%以上，人工染菌杀灭率应达到99.9%。

3.环境监测 环境监测包括对空气、仪器设备、物体表面和工作人员手的监测。在怀疑有实验室污染时应进行环境监测。

4.消毒灭菌物品的监测应定期对消毒、灭菌物品进行随机抽检，消毒物品不得检出致病性微生物，灭菌物品不得检出任何微生物。