6.2.4.7 分析条件的选择

(1)提取溶液的选择

本方法对比实验了动物组织中提取大环内酯类药物的主要提取溶液，包括磷酸盐缓冲溶液、0.3%偏磷酸-甲醇溶液、乙腈、Tris溶液和乙酸盐溶液等，实验结果见表6-30。

表6-30 不同提取溶液的提取效果(河豚鱼，50μg/kg，%)

从表6-30中数据可以看出，当用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液作为提取液时，8种大环内酯类抗生素的回收率结果不可信；当用0.3%偏磷酸甲醇溶液(7+3)作为提取液时，除林克霉素的回收率小于70%、红霉素的回收率非常不稳定(30%～106%)，其他6种大环内酯类抗生素的回收率大于70%；当用乙腈作为提取液时，除竹桃霉素、泰乐菌素的回收率大于70%外，其他6种大环内酯类抗生素的回收率均小于31.4%；当用0.1mol/L乙酸盐溶液作为提取液时，螺旋霉素的回收率为154.0%、替米考星的回收率小于70%，其他6种大环内酯类抗生素的回收率均大于70%；当用Tris溶液作为提取液时，8种大环内酯类抗生素的回收率在78.4%～99.1%范围。所以本方法采用Tris溶液作为提取液。

(2) 不同固相萃取柱对回收率的影响

在前述选定条件下，对Varian C18、OasisHLB(500)、OasisHLB(200)、MCX和Bakerbondspe C18五种固相萃取柱的萃取效率进行了比较，结果见表6-31。结果表明OasisHLB(500)固相萃取柱的效果最理想。因此，本方法选择OasisHLB(500)固相萃取柱为净化柱。

表6-31 不同固相萃取柱对回收率的影响(河豚鱼，50μg/kg ， %)

(3) 内标的选择

大环内酯测定的内标物选择主要有罗红霉素和林可霉素，其对比实验结果见表6-32。

表6-32 不同内标的选择(河豚鱼，50μg/kg，%)

从表6-32中数据可以看出，当用林可霉素为内标时，只有替米考星、吉他霉素、交沙霉素3种大环内酯类抗生素中的回收率在94.2%～96.5%之间；当用罗红霉素为内标时，8种大环内酯类抗生素的回收率在76.5%～117.0%范围。所以本方法采用罗红霉素作为内标。

6.2.4.8 线性范围和测定低限

配制浓度分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的四个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液，在选定的条件下进行测定，进样量为20μL，用峰高对标准溶液中各被测组分的浓度作图。林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素、交沙霉素的绝对量在0.04～1.0ng范围内均呈线性关系，其线性方程和相关系数见表6-33。

表6-33 8种抗生素线性方程和相关系数

该方法操作条件下8种抗生素在添加水平2.0～50μg/kg范围时，响应值在仪器线性范围之内，信噪比S/N大于5。根据最终样液所代表的试样量，定容体积，进样量和进行测定时所受的干扰情况，确定本方法测定河豚鱼中的林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素均为2.0μg/kg；鳗鱼中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素均为2.0μg/kg，螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星均为5.0μg/kg。

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