6.2.4.5 样品前处理

(1) 试样制备

从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。将试样于-18℃保存。

(2) 提取

称取5g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管中，加入20.0uL内标工作溶液和10.0mL tris溶液，于振荡器上剧烈振荡10min。以12000r/mi转速离心10min，取上清液以小于1.0mL/min的流速通过OasisHLB固相萃取柱。再加入10.0mL tris溶液，于振荡器上剧烈振荡10min。以12000r/mi转速离心10min，取上清液以小于1mL/min的流速通过OasisHLB固相萃取柱。

(3) 净化

待样液全部流出后，先后用10mL水和10mL甲醇溶液洗柱，弃去全部流出液，将固相萃取柱用真空泵抽干1h。再用10mL甲醇洗脱于15mL氮吹管中，用氮气浓缩仪于50℃水浴中吹至近干，准确加入1.0mL定容液，于超声波仪中超声波助溶残渣。用阴性样品，按上述步骤制备空白样品提取液。过0.2μm滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

按上述操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液。

6.2.4.6 测定

(1)液相色谱条件

色谱柱：Atlantis C18，内径3μm，150mm×2.1mm(内径)或相当者：流动相A：乙腈；流动相B：0.1%甲酸水溶液；流动相C：甲醇；梯度洗脱条件见表6-15；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL。

(2) 质谱条件

离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测：电喷雾电压：5500V；雾化气压力：0.24MPa；辅助气流速：0.4L/min；离子源温度：550℃；碰撞室出口电压：2.0V；定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表6-4。

(3) 定性测定

被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差±2.5%之内；且待测样品溶液中，被测物中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液中被测物的各定性离子相对丰度的比值k，偏差不超过表1-5规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

(4) 定量测定

在仪器的最佳工作条件下，用基质标准混合工作溶液分别进样，以各标准溶液中被测组分峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标，以各标准溶液被测组分浓度(ng/mL)与内标物浓度的比值为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。用基质标准混合工作溶液的工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的响应值在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的参考保留时间见表6-4。

林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的标准物质多反应监测(MRM)色谱图见图6-3。