6.1.4.1 前处理方法

(1)提取

1)大环内酯类

MALs呈弱碱性，微溶于水，在水溶液中-般容易分解，尤其是在酸性条件下更不稳定。常用的提取试剂有甲醇、乙腈、乙醚，以及偏磷酸-甲醇、Tris缓冲溶液、MCI-Vain-EDTA缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液等混合溶剂和缓冲溶液。

赵东豪等凹采用乙腈提取猪肉中的MALs，再用正已烷脱脂，C18柱净化，4%氨化甲醇洗脱后，液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)在多反应监测(MRM)模式进行定量和定性分析。替米考星和吉他霉素的检测限(LOD)为0.1μg/kg，红霉素、泰乐菌素、罗红霉素和交沙霉素为0.05μg/kg；6种药物在50μg/kg、100μg/kg和200μg/kg添加水平上，回收率均在62.2%～102%之间，相对标准偏差(RSD)在2.7%～16%之间。Hammel等以建立了蜂蜜中包括8种MALs等42种兽药的多残留检测方法。主要采取液液萃取(LLE)的方法进行药物的提取，尝试了四种不同萃取溶剂(乙腈、TCA+乙腈、NFPA+乙腈、酸性水解后加入乙腈)，并应用超声提取方法进行样品处理，通过实验比较，不同类药物的萃取效果差别较大，但实验表明，乙腈对于MALs的萃取是十分有效的。Croteau等比较了一些溶剂对血浆和肝脏样品中ERM的萃取效率，包括氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、异戊醇-正已烷、叔丁基甲醚、乙醚和正已烷。结果表明叔丁基甲醚和乙醚萃取的回收率最高，共萃取杂质最少。

Horie等用0.3%偏磷酸～甲醇(7+3，v/v)提取，高效液相色谱(HPLC)法同时检测肉中5种MALs。添加浓度1.0μg/g水平上的回收率为70.8%～90.4%，LOD为0.05μg/g。李存等问建立了猪组织中替米考星残留的检测方法。用乙腈和磷酸二氢钾缓冲液提取，然后进行固相萃取柱净化，HPLC检测。肌肉和肝脏的LOD分别为0.01μg/g和0.025ug/g，定量限(L0Q)分别为0.02μg/g和0.05ug/g；肌肉在0.02～2.0μg/g添加范围内，平均回收率在84.2%～96.6%之间，变异系数(CV)在5.0%～8.2%之间；肝脏在0.05～5.0ug/g添加范围内，平均回收率在82.0%～92.8%之间，CV在5.8%～1.3%之间。Draisci等用磷酸盐缓冲液氯仿提取牛肉、牛肝和牛肾中的MALs。样品中加入2mL磷酸缓冲液和10mL氯仿涡旋振荡，离心，收集氯仿层，经固相萃取净化后，LC-MS/MS检测。该方法泰乐菌素的回收率为83%～90%，替米考星为82.5%～89%，红霉素为80.4%～86.3%，RSD均低于14.9%。

Dubois等用pH10.5的tris缓冲液提取肉、肾、肝以及鸡蛋、牛奶中的5种MALs，用钨酸钠沉淀蛋白，固相萃取柱净化，最后LC-MS/MS分析。在添加浓度0.5～2MRL时，回收率为80%～110%，RSD为2%～13%。夏敏等采用MCI-Vain-EDTA缓冲溶液提取肉中5种MALs，提取液通过C18固相萃取柱净化，LC-MS/MS测定。方法回收率约为50%～60%。

2)林可胺类

林可胺类药物常用的提取溶剂--般为碳酸盐缓冲液和乙腈等。

徐锦忠等建立了蜂蜜中林可霉素和氯林可霉素的残留检测方法。样品用0.1mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(pH9.0)提取，经固相萃取净化，氮气吹干浓缩，甲醇-水(30+70，v/v)复溶后，LC-MS/MS测定。两种抗生素的LOD为0.1μg/kg，LOQ为0.5μg/kg；在1.0～200μg/L浓度范围线性良好(r2>0.996)；在1.0μg/kg、5.0μg/kg、20.0μg/kg添加水平，两种抗生素的平均回收率为80%～110%，日内测定结果的RSD小于8%，日间小于15%。赵明等用碳酸盐缓冲液(pH9.0)提取蜂蜜中的林可霉素，用C18固相萃取柱净化，甲醇和乙腈洗脱，氮气吹干，残渣用流动相溶解后，用HPLC测定。样品平均回收率为93.02%±1.22%，日内CV为0.54%～1.58%，日间CV为0.27%～1.49%，方法LOD为0.1ug/mL。

3)大环内酯类和林可胺类

跨种类药物残留分析，特别是在提取过程中，需要综合考虑药物理化性质，尽量选择适用性强的溶剂。在MALs和林可胺类药物残留的同时分析中，最为常用的溶剂是乙腈，而且必要时可以采用加压溶剂萃取(PLE)等辅助手段来提高萃取效率。

孙雷等建立了动物源食品中林可霉素、克林霉素、吡利霉素、红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、吉他霉素、克拉霉素、阿奇霉素、罗红霉素和交沙霉素等13种林可胺类和MALs残留检测的超高效液相色谱(UPLC)-MS/MS方法。组织样品经乙腈提取，无水硫酸钠脱水，离心后，收集上清液，用正己烷去除脂肪等杂质，然后用UPLC-MSMS检测。13种药物在5～200μg/L浓度范围内呈现良好的线性关系，相关系数R2均大于0.990；13种药物在动物组织中的LOD均为1μg/kg，LOQ均为2.5μg/kg；在2.5ug/kg、25μg/kg、100μg/kg浓度水平，13种药物的回收率为72%～104%，批内批间RSD为4.8%～14.3%。Juan等采用PLE提取肉和牛奶中5种MALs和2种林可霉素类药物。2.5mL(或2.5g)样品中加入11g的海沙和0.5g EDTA，充分混合之后，装入不锈钢提取池，在末端进行纤维薄膜过滤器的密封。PLE的温度为40℃，压力为1500psi。第一个循环用100%的乙腈提取，25%的流量，然后是10min的静电期，获得的提取液用石油醚进行脱脂，离心后进行浓缩，乙腈复溶后，LC-MS/MS检测。该方法完全满足欧盟残留检测的要求。Jimenez等建立了鸡蛋中41种药物(包括大环内酯类和林可胺类)的残留分析方法。以乙腈琥珀酸缓冲液(1+1，v/v)作为提取液，PLE在70℃、1500psi下提取，静电循环为3min，在同样的温度和压力下补加一定量的提取液之后，进行第二个循环。收集所有提取液，浓缩后，复溶，UPLC-MS/MS分析。该方法的错误率控制在10%以内，重复性RSD均在10%～20%之间。

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