(4)液相色谱-质谱联用法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

针对ASs的残留分析，GC技术需要进行衍生化，样品的前处理相对比较麻烦；而随着LC-MS技术的发展，越来越多的研究人员将这一技术应用到ASs的残留分析中，样品一般不需要衍生化，而且可以对待测物进行定性和定量分析。LC-MS既可以采用电喷雾电离(ESI)，也可以采用大气压化学电离(APCI)，已逐渐成为分析ASs残留的主要手段。

1)电喷雾电离(ESI)

黄士新等用液相色谱-单四极质谱(LC-MS)法分析了猪尿中的丙酸睾酮。色谱柱为Waters Sunfire TM C18柱，流动相为乙腈-0.2%甲酸(81+19，v/v)，ESI电离，正离子扫描，SIM模式定量检测。该方法在1～100μgL的浓度水平上，平均回收率为70.13%～83.33%，LOD为1.0μg/L。

黄冬梅等建立了水产品中苯丙酸诺龙和诺龙残留量的LC-MS/MS检测方法。色谱柱为CAPCELL PAK C18柱，流动相为0.1%甲酸溶液和0.1%甲醇溶液，梯度洗脱，流速0.25mL/min，ESI正离子模式电离，MRM扫描。在0.005～0.25μg/mL范围内线性关系良好；在不同浓度添加水平下，两种激素的回收率分别为84.2%～91.3%、76.8%～98.6%，RSD分别为6.8%～13.6%、3.3%～11.3%；LOD均为5.0μg/kg。徐锦忠等建立了鸡肉和鸡蛋中合成类固醇类激素睾酮、甲基睾酮、群勃龙、去氢睾酮、诺龙、美睾酮、康力龙、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙的LC-MS/MS多残留检测方法。用C18色谱柱分离，以甲醇和0.1%甲酸水溶液作为流动相，梯度洗脱，流速0.25mL/min，ESI电离，在SRM模式下定性及定量分析。方法的LOQ为0.5μg/kg，平均回收率为73.4%～108.9%，RSD为3.4%～13.4%。陈晓红等建立了牛奶中21-羟基孕酮、17-羟基孕酮、炔孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮和孕酮等8种孕激素残留的UPLC-MS/MS检测方法。色谱柱为Shim-packXR-ODSII柱，流动相为0.1%甲酸(含5mmoL/L乙酸铵)和90%乙腈溶液，梯度洗脱，流速0.25mL/min，ESI电离，正离子扫描，MRM检测。在0.5～50.0μg/kg范围内具有良好的线性，相关系数大于0.999，LOQ在0.1～0.5μg/kg之间，添加回收率为73.0%～97.5%。Regal等建立了牛血清中雌激素(苯甲酸雌二醇)的LC-MS/MS检测方法。样品经1.5moL/L羟胺溶液(pH10)羟胺衍生化后，用LC-MS/MS分析。HPLC分离柱为Synergi 2.5 um Fusion-RP 100A(100mm×2mm)柱，流动相为水和甲醇(均含0.1%甲酸)，梯度洗脱，流速1.0mL/min，采用ESI、正离子扫描，MRM检测。方法CCa为6.00～19.46ng/L，CCβ为11.84～33.02ng/L。Nielen等利用LC-MS/MS法分析牛毛发中的睾酮含量。色谱柱为Waters Symmetry C8柱，流动相为乙腈-水-甲酸(80+20+2，v/v)和乙腈-甲酸(100+2，v/v)，梯度洗脱，流速0.3mL/min，采用ESI、正离子扫描，MRM模式定量检测。该方法的LOD可达到2～5ng/g，回收率在97%～105%之间。
张鸿伟等建立了同时检测肌肉中16种ASs的LC-Q/Trap-MS方法。采用CAPCELL PAK C18 MG II柱(150mm×2.0mm，5.0μm)分离，0.1%甲酸-乙腈溶液和0.1%甲酸-5mmoL/L甲酸铵为流动相，梯度洗脱，流速为0.4mL/min，采用ESI电离，正离子模式，预设定MRM-信息依赖性采集(IDA)-增强子离子扫描(EPI)模式检测，在线EPI谱库确证，内标法定量。16种ASs线性关系良好(r≥0.999)，LOQ为0.029～0.36μg/kg，3个添加水平(0.5μg/kg、2.0μg/kg和20μg/kg)下的回收率为89.9%～118%，RSD为6.3%～16.2%。

2)大气压化学电离(APCI)

Kaklamanos等建立了检测肌肉中20种ASs的LC-MS/MS方法。样品经水解、叔丁基甲醚提取，正己烷LLP净化，HLB和氨基SPE柱净化后，用LC-MS/MS检测。色谱柱为ODS C18柱(150mm×4.6mm，5um)，流动相为水和甲醇，梯度洗脱，流速为0.7mL/min。APCI电离源进行正负离子扫描，MRM模式定量。20种ASs的CCa为0.03～0.14μg/kg，CCβ为0.05～0.24μg/kg，回收率为78.8%～119.4%，RSD为1.9%～14.1%。Vanhaecke等建立了牛肉中34种ASs(10种雌激素、14种雄激素和10种孕激素)残留的UPLC-MS/MS检测方法。用Hypersil色谱柱(100mm×2.1mm，1.9μm)分离，流动相为甲醇和水，梯度洗脱，流速0.3mL/min，APCI源在正负离子模式下采集数据，MRM检测。方法的CCa为0.04～0.88μg/kg，CCβ为0.12～1.9μg/kg，日内与日间CV均低于20%，线性关系良好(r>0.99)。Schmidt等采用LC-MS/MS检测牛肉中ASs(17β-TRE，17β-BOL，17a-MTS，STA等)，色谱柱为LunaC18(150mm×2mm，5um)，流动相为乙腈-水(35+65，v/v)和乙腈，柱温为40℃，梯度洗脱，流速为0.5mL/min，APCI正离子，MRM模式检测。方法的CCa为0.15～0.79μg/kg，CCβ为0.19～1.10μg/kg，回收率为95%～104%，RSD为10.7%～19.5%。

动物源基质中ASs的部分HPLC或LC-MS残留检测方法见表8-6。

表8-6 动物源基质中ASs的部分HPLC和LC-MS残留检测方法

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