8.2.1.6 测定

(1)液相色谱条件

色谱柱：C8色谱柱，5um，150mm×2.1mm(内径)；柱温：40℃；进样量：20μL；流动相、流速及梯度洗脱条件见表8-7。

表8-7 流动相、流速及梯度洗脱条件

(2)质谱条件

离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度；定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量见表8-8。

表8-8 睾酮、表睾酮和孕酮及内标物的质谱参数

(3)定性测定

每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1-5规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

(4)定量测定

在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以标准溶液中被测组分峰面积和内标物峰面积的比值为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度与内标物浓度的比值为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。内标法定量。睾酮、表睾酮和孕酮标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图8-8。

图8-8 孕酮、睾酮、表睾酮标准物质的多反应监测(MRM)色谱图