9.2.5.1 适用范围

适用于动物肌肉、肝脏、鱼肉、蛋和牛奶中玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮残留量的高效液相色谱-串联质谱的测定。方法检出限为1μg/kg。

9.2.5.2 方法原理

样品经β-葡萄糖苷酸/硫酸酯复合酶水解后，用乙醚提取，提取液经液液分配、HLB固相萃取柱净化后，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

9.2.5.3 试剂和材料

甲醇、乙腈：色谱纯；无水乙醚、三氯甲烷、氢氧化钠、乙酸钠(NaAc·3H2O)、冰醋酸：分析纯；磷酸：纯度大于85%。

0.5mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠，用水溶解并定容至1L。

0.05mol/L乙酸钠缓冲溶液：称取6.8g乙酸钠，用950mL水溶解，冰醋酸调节pH至4.8，定容至1L。

磷酸溶液(1+4，v/v)：10mL磷酸和40mL水混合。

甲醇-水溶液(1+1，v/v)：50mL甲醇和50mL水混合。

β-葡糖苷酸酶/硫酸酯酶：96000unit/mL β-葡糖苷酸酶；390unit/mL硫酸酯酶(H-2，Formhelix pomatia)。

玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇和玉米赤霉烷酮标准物质：纯度≥99%。

100μg/mL标准储备溶液：分别准确称取适量标准品(精确至0.1mg)，用乙腈溶解，配制成浓度为100ug/mL的标准储备溶液。-18℃以下冷冻避光保存。

10μg/mL和1.0μg/mL的混合标准中间溶液：分别准确吸取1.0mL和0.10mL标准储备溶液于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为10μg/mL和1.0μg/mL混合标准中间溶液。0～4℃冷藏避光保存。

基质混合标准工作溶液：根据需要，取适量的混合标准中间溶液，用空白样品提取液配成不同浓度的基质混合标准溶液。基质混合标准工作溶液现用现配。

OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg/6mL。使用前分别用5mL甲醇和5mL水预淋洗。滤膜：0.20μm。

9.2.5.4 仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；组织捣碎机；分析天平：感量0.1mg和0.01g；移液器：10～100μL、100～1000μL；均质器：10000r/min；涡旋混合器；恒温振荡器；离心机：4000r/min；pH计：测量精度±0.02pH单位；氮吹仪；固相萃取装置；具塞离心管：50mL；刻度试管：10mL。

9.2.5.5 样品前处理

(1) 试样制备

实验室样品用组织捣碎机绞碎，分出0.5kg作为试样。试样置于-18℃冰箱，避光保存。

(2) 水解

称取5g试样(精确至0.01g)于50mL具塞离心管中，加入10mL乙酸钠缓冲溶液和0.025mL β-葡萄糖苷酸/硫酸酯复合酶，旋涡混匀，于37℃水浴中振荡12h。

(3) 提取

水解后加入15mL无水乙醚，振荡提取5min后，以4000r/min离心2min，将上清液转移至浓缩瓶中，再用15mL无水乙醚重复提取一次，合并上清液，40℃以下旋转浓缩至近干。残留物加1.0mL三氯甲烷溶解后，转入10mL离心管中，再用3mL氢氧化钠溶液润洗浓缩瓶后转移至同一离心管中，旋涡混匀，以4000r/min离心2min，吸取上层氢氧化钠溶液。再用3mL氢氧化钠溶液重复润洗、萃取一次，合并氢氧化钠溶液，加入1mL磷酸溶液，混匀后待净化。

(4) 净化

将样品提取液转入HLB固相萃取柱。用5mL水、5mL甲醇-水溶液淋洗，弃去；再用10mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液。整个固相萃取净化过程控制流速不超过2mL/min。洗脱液在40℃以下用氮气吹干。残留物用1.0mL乙腈溶解，旋涡混匀后，过0.2μm滤膜，供仪器测定用。