(4)高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)

HPLC是现今最为常用的残留检测仪器之一。镇静剂类药物的疏水性和不挥发性，通常适用反相HPLC法进行分离；而其具有紫外和荧光吸收结构特征，可以用紫外检测器(ultravioletdetector，UVD)、二极管阵列检测器( diode-array detector，DAD； photo-diode array detector， PDA)或荧光检测器( fluorescence detector，FLD)检测。

1)UVD

戴晓欣等建立了水产品中苯巴比妥残留量的HPLC测定方法。采用乙腈-水(40+60，v/v)为流动相，在Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5um)色谱柱上分离，流速0.9mL/min，柱温30℃，220nm波长检测。在0.05～4.0 μg/mL范围线性良好，相关系数为0.999；方法回收率在80.49%～ 102.42%之间，RSD为1.52%～10.15%；方法LOD为10 ug/kg， LOQ为30 μg/kg。

Aresta等建立尿液中地洛西泮的HPLC方法。色谱柱为Supelco sil LC-18-DB (250 mm× 4.6 mmi.d，5μm)，流动相为乙腈-水(65+35， v/v)，流速1 mL/min，室温检测，检测波长为230 nm。方法LOD和LOQ分别为5 ng/mL和27 ng/mL，回收率为90%。

Tanaka等建立了测定血清中氯丙嗪、左米丙嗪、甲哌丙嗪、奋乃静、异丙嗪等12种吩噻嗪类药物的HPLC-UVD检测法。Inersil ODS-SP (250mm×4.6mm， 5μm) C18反相色谱柱分离，乙腈-甲醇-30mmol/L磷酸二氢钠(pH5.6) (300+200+500，v/v) 为流动相，流速0.9 mL/min，检测波长250nm。方法回收率为87.6%～99.8%，LOD为3.2～ 5.5ng/mL。Holland 等3)建立了牛和猪肾脏中噻拉嗪及其代谢物(2，6-二甲苯胺)的HPLC-UVD测定方法。采用Bondapak phenyl 色谱柱分离，乙腈～乙酸钠-乙酸溶液为流动相，UVD在225 nm检测。两种药物回收率均大于78%，LOD为10 μg/kg，LOQ为25 μg/kg。

Zhang等建立了兔血浆中奥氮平、氟哌啶醇、氯丙嗪、齐拉西酮、利培酮等药物的HPLC-UVD检测方法。以丙咪嗪为内标，分析柱为Agilent Eclipse XDB C8 (150 mm×4.6 mm，5um)，流动相为乙腈和30 mmol/L醋酸铵(含0.05%三乙胺)，梯度洗脱，检测波长为240 nm。方法LOD为2.0 μg/L，线性范围为2.0～500.0 μg/L，相关系数为0.998，日内和日间CV均小于7.44%。Kishore 等建立了血液中卡马西平、苯妥英钠、鲁米那和地西泮的HPLC检测方法。采用Waters Spherisorb C18 ODS(10 um，4.6mm×250 mm)色谱柱分离，甲醇-乙腈-水(42+16+42，v/v)为流动相，UVD检测波长为220 nm。方法回收率为98%～104%，日内和日间RSD均小于6.0%，LOD 在0.1～0.2g/L之间。魏晋梅等建立了HPLC同时测定羊肉中的11种镇静剂类药物的方法。样品用1%氨水-乙腈溶液超声提取，色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18 (250 mm×4.6mm，5um)，以甲醇-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱，检测波长为245nm和254nm，进样量10μL。甲苯噻嗪、唑吡坦、咔唑心安、氟哌啶醇、氯氮卓、丙酰丙嗪、氯丙嗪、奋乃静、氟奋乃静在0.02～200μg/mL范围有良好的线性关系，奥沙西泮和氟哌利多分别在0.005～200μg/mL和0.05 ～200μug/mL范围有良好的线性关系；11种药物的平均回收率在64.0%～121.3%之间，RSD小于20%。

2) DAD/PDA

由于DAD/PDA能够给出待测物的光谱信息，在定量检测同时，可以初步定性并定量，不过检测的灵敏度不如UVD。
洪月玲等测定猪肉及虾肉中氯丙嗪，分析柱为SHIM PACKVP ODS色谱柱(150mm×4.6mm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸(7+3，v/v)，DAD检测，检测波长为254 nm。各组织回收率均大于85%，CV均小于10%，LOD为4μg/L。王海娇等应用反相HPLC测定猪肉中的地西泮残留，色谱柱采用C18柱(2mm×150mm，3μm)，流动相为甲醇-水-25mmol/L乙酸铵溶液(64.8+35.0+0.2，v/v)，流速0.5mL/min，DAD在波长254nm测定。在100～40μg/mL范围内呈线性相关，平均回收率为80.8%，RSD小于5%。

3)FLD

FLD的灵敏度和选择性都比UVD高，适合于具有荧光结构的药物检测。

Cerkvenik-Flajs等用HPLC-FLD测定动物肾脏中的阿扎哌隆及其代谢物阿扎哌酮。色谱分离采用Li Chrospher 60-RP反相液相色谱柱，流动相为pH 4.5 0.05 mol/L磷酸盐缓冲液-四氢呋喃-乙腈(60+5+35，v/v)和pH 4.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液，梯度洗脱，流速0.7 mL/min，荧光检测激发波长为245nm，发射波长为345nm。方法定量线性范围为10～ 150 μg/kg； LOD为1.2μg/kg和1.1μg/kg，LOQ为10μg/kg和5 μg/kg；平均回收率为88.2%(阿扎哌隆)和91.2%(阿扎哌酮)。