16.2.3.6测定

(1)液相色谱条件

色谱柱： Waters Sunfire ODS C18，5μm，250mm×4.6mm(内径)或相当者；柱温：30℃；流动相：0.1%甲酸水溶液；液相梯度见表16-17；流速：800μL/min；进样量：10μL。

表16-17 液相色谱流动相梯度表

(2)质谱条件

离子源：大气压化学电离源(或与之等效电离源)；扫描方式：正离子扫描(+)；检测方式：多反应离子监测(MRM)；电喷雾电压(IS)：5250V；雾化气(NEB)相对开放流量：14.00mL/min；气帘气(CUR)相对开放流量：7.00mL/min；离子源温度(TEM)：500℃；碰撞池出口电压/V(CXP)：11V；选择离子驻留时间：50msec；碰撞池入口电压(EP)：10.0V；碰撞气(CAD)相对开放流量：8mL/min；辅助气流压力：60PSI；去簇电压(DP)：35V；焦环聚焦电压(FP)：200V；喷雾器放电针电流(Nebulizer Current，NC)：2μA；其他仪器参数：DF：-200.0V；CEM：2300.0V。定性离子对、定量离子对、碰撞能量、保留时间见表16-18。

表16-18 硝基咪唑类药物的定性离子对、定量离子对、碰撞能量、保留时间

(3)定性测定

被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物保留时间与标准溶液中保留时间偏差在±2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表1-5规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。

(4)定量测定

在仪器正常工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度为横坐标绘制工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，超过线性范围则应适当稀释后再进行分析。方法采用外标法定量。9种硝基咪唑类药物和2种氛代内标物的多反应监测(MRM)色谱图见图16-7。

图16-7 9种硝基咪唑类药物和2种氘代内标物的多反应监测色谱图
(a)羟基化甲硝咪唑：(b)甲硝唑：(c)2-羟甲基-1-甲基化-5-硝咪唑：(d)氘代2-羟甲基-1-甲基化-5-硝味唑；(e)特尼哒唑；(f)洛硝哒
唑；(g)地美硝唑：(h)替硝唑；(i)羟基化异丙硝唑：(j)氘代羟基化异丙硝唑：(k)异丙硝唑