19.2.1.5 样品前处理

(1) 试样制备

牛甲状腺样品的制备：取50～100g阴性牛甲状腺组织，加入3倍重量的干冰，用组织捣碎机绞碎后，使干冰在室温下蒸发，备用。牛肌肉组织用组织捣碎机绞碎，分出0.5kg作为试样备用。试样置于-18℃冰柜中避光保存。

(2) 样品称取

称取5份阴性样品，每份样品为1g(精确到0.01g)，将。上述样品分别置于50mL棕色离心管中，加入不同量混合标准工作溶液，使各被测组分的浓度均为1.0ng/mL、2.0ung/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL。再分别加入适量内标标准工作溶液，使其浓度均为2.0ng/mL。

(3) 提取和初次净化

上述离心管中分别加入10mL乙酸乙酯，3g无水硫酸钠，20μL巯基乙醇，30uL 0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液，均质15s，再用5mL乙酸乙酯洗涤均质器刀头，二者合并，4000r/min离心5min，取上清液于50℃水浴氮气吹干。用2mL乙腈溶解残余物，加入3mL正己烷振荡1min，4000r/min离心5min，吸取并弃掉正已烷，再加3mL正已烷重复一次。剩余溶液在氮气吹干仪上50℃水浴吹干。用0.5mL三氯甲烷溶解残余物，边摇边在超声波水浴中停留几秒钟，加入3mL正已烷，涡旋混匀，倒入下接预处理好的Sep-Park Amino Propyl固相萃取柱的贮液器中，在固相萃取装置上使样液以小于2mL/min的流速通过固相萃取柱，待样液全部通过固相萃取柱后用10mL正己烷淋洗固相萃取柱，弃去全部流出液。用5mL洗脱液将目标物洗脱到25mL棕色离心管中，用50℃水浴氮气吹干。

(4)衍生化和再次净化

用5mL0.1mol/LpH=8的磷酸盐缓冲溶液溶解上述残留物，加入0.3mL衍生剂，涡旋混合1min，在50℃恒温振荡水浴避光反应3h。衍生液放至室温，用0.2mol/L盐酸调节pH在3～4之间，溶液倾入下接Oasis HLB固相萃取柱的贮液器中，在固相萃取装置上使样液以小于2mL/min的流速通过Oasis HLB柱，待样液全部通过固相萃取柱后用10mL水洗固相萃取柱，弃去全部流出液。用真空泵在65kPa负压下抽干OasisHLB固相萃取柱10min。再用5mL乙酸乙酯洗脱被测物于25mL棕色离心管中，在氮气吹干仪上50℃水浴吹干，残余物加300μL无水乙醇溶解，再加700μL定容液定容，混匀后过0.2um滤膜供液相色谱-串联质谱测定。

(5)实测样品溶液的制备

称取待测样品1g(精确到0.01g)于50mL棕色离心管中，加入内标工作溶液，使其含量均为2.0ug/kg，按上述提取和净化步骤操作。

(6)空白基质溶液的制备

称取阴性样品1g(精确到0.01g)于50mL棕色离心管中，按上述提取和净化步骤操作。

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