(3)衍生化方法

1)紫外检测衍生

β-内酰胺环母体的紫外检测波长在200～235nm之间，紫外吸收缺乏特征性，干扰组分影响较大，因此应用液相色谱检测时往往需要衍生化，使其具有特征吸收。衍生化分为柱前和柱后两种。其中，柱后衍生需另外加泵、反应芯、T型混合器、脱气机等，操作复杂；而广泛使用的柱前衍生化是在咪唑或1，2，4-三唑催化下，将青霉素反应形成青霉烷酸硫醇汞衍生物。
Sorensen等采用HPLC测定动物组织中7种PENs时，用苯甲酸酐衍生化药物结构中的氨基，降低化合物极性，再用1，2，4-三唑-氯化汞衍生化，60℃恒温水浴衍生化1h，使其生成最大吸收为323nm的衍生物。7种PENs的LOD为8.9～20.9μg/kg，平均回收率在58%～82%之间。刘媛等建立了反相HPLC分析鸡肉、猪肉、猪皮、猪脂肪等动物组织样品中阿莫西林残留量的方法。对4种动物组织样品采用磷酸盐缓冲溶液提取、三氯乙酸沉淀蛋白，C18固相萃取柱净化，然后采用1，2，4-三唑-氯化汞衍生化试剂，60℃恒温水浴衍生化1h，HPLC在323nm处检测。该方法测得阿莫西林在8.6～860μg/L线性范围内线性相关(r=0.9997)；动物组织样品中阿莫西林的加标回收率为70.9%～86.8%，RSD为3.2%～16.4%；LOD低于10μg/kg；批内、批间RSD均小于10%。

Beconi-Barker等建立了猪肉、肝脏、肾脏以及脂肪组织中头孢噻呋及其代谢物残留量的HPLC方法。采用赤藻糖醇盐缓冲液提取，碘代乙酰胺柱前衍生，加入3mL碘乙酰胺，涡动混匀后室温放置30min，用5%磷酸溶液调至pH2.5～2.6，然后将组织样品离心，C18固相萃取柱净化，HPLC在266nm检测。方法回收率在70%～95%之间，LOD为100μg/kg。

2)荧光检测衍生

也有反应形成荧光衍生物的衍生化方法报道。

罗道栩等用三氯乙酸溶液沉淀牛奶蛋白并提取氨苄青霉素残留，将氨苄青霉素和甲醛在酸性条件下加热生成2-羟基-3-苯基-6-甲基吡嗪，再用FLD进行检测。荧光检测激发波长为346nm，发射波长为422nm。该方法测得氨苄青霉素的LOD为1μg/L，LOQ为2μg/L，回收率为70%～110%，批内CV小于10%，批间CV小于15%。Popelka等采用柱前衍生化法检测鸡肉中5种PENs。样品经0.01moL/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)匀质，30%三氟乙酸沉淀蛋白，离心过滤，上清液经甲醛衍生化(100℃反应45min)，然后经二乙醚提取，HPLC-FLD检测，激发波长和发射波长分别为346nm、422nm。方法测得5种药物的LOD为5μg/kg。Iwaki等采用柱前荧光衍生化测定PENs，衍生化时首先碱性水解待测物，使β-内酰胺环打开产生伯胺基团，该功能基又与7-氟-4-硝基苯-2-草酸-1，3-二唑反应，产生具有荧光特性的物质，激发波长为470nm，发射波长为530nm。该方法LOD为30～85ng/mL，线性范围为0.2～100μg/mL。

CEPs也可以通过衍生化反应后采用荧光检测器测定。Meng等建立了一种检测人血浆中头孢氨苄的HPLC-FLD柱前衍生化方法。头孢氨苄在5mmoL/L硼酸盐溶液(pH8.5)中经芴甲氧羰酰氯(FMOC-CI)进行衍生化，25℃反应15min，衍生化产物经XDB-C18色谱柱分离，激发波长和发射波长分别为268nm、314nm。该方法测得血浆中头孢氨苄的LOD为0.014ug/mL，线性范围为0.0234～58.5μg/mL。Blanchin等建立了一种检测血浆和尿液中6种CEPs(头孢克洛、头孢氨苄、头孢拉定、头孢沙定、头孢甘酸和头孢羟氨苄)的HPLC方法。采用荧光胺柱后衍生化，衍生化系统为4.5m×0.25mmi.d.的PTPE毛细管线圈，衍生剂流速为0.25mL/min，在室温下反应，驻留时间为10.6s。血浆中的回收率为88.7%～105.6%，尿液中的回收率为86.2%～113.6%。作者比较了荧光检测和紫外检测在相同色谱条件下的线性关系、重复性和检测限。结果显示，荧光检测灵敏度约为紫外检测灵敏度的两倍，荧光检测6种CEPs的LOD为0.3～1.8mg/L，紫外检测的LOD为0.6～2.7mg/L。

3)气相色谱检测衍生

β-内酰胺类药物为强极性、热不稳定性和难挥发性化合物，采用气相色谱测定时，需要进行甲酯化衍生反应来提高其挥发性和降低极性。Preu等建立了牛肉中青霉素的GC检测方法。样品净化液用氮吹蒸干后，加入100μL重氮甲烷进行衍生化，再用GC-NPD或GC-MS进行检测。该方法测得青霉素的LOD为3ug/kg。Meetsehen等用GC测定动物组织中7种PENs。用重氮甲烷衍生化，形成易挥发的青霉素甲基酯类化合物，有效提高了检测灵敏度和再现性，其回收率在46%～73%之间。

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