4)免疫传感器(immunesensor，IS)

免疫传感器就是利用抗原(抗体)对抗体(抗原)的识别功能而研制成的生物传感器。作为一种新兴的生物传感器中，免疫传感器以其鉴定物质的高度特异性、敏感性和稳定受到青睐，它的问世使传统的免疫分析发生了很大的变化。免疫传感器主要包括表面等离子体共振(SPR)和电化学免疫传感器(ECIS)等。

A.表面等离子体共振(surface plasmon resonance， SPR)

Ferguson等采用涂有CAP衍生物和抗体的传感器芯片，开发了快速检测禽肉、蜂蜜、虾、牛奶中CAP和葡糖苷酸CAP残留的SPR分析方法。该抗体对葡糖苷酸CAP的交叉反应率为：73.8%(禽肉)、69.2%(蜂蜜)、75.7%(虾)、84.8%(奶)，与其他化合物没有交叉反应。脂肪含量小于3.5%的牛奶可以直接检测，禽肉、蜂蜜、虾需要用乙酸乙酯提取后再用传感器测定。方法CCa为：0.005μg/kg(禽肉)、0.02ug/kg(蜂蜜)、0.04ug/kg(虾)、0.04ugkg(奶)，CCβ分别为：0.02ug/kg、0.02ug/kg、0.07ug/kg、0.05ug/kg。Ashwin等采用SPR传感器筛选检测蜂蜜、虾及动物内脏中的CAP和葡糖苷酸CAP。样品中分析物经酶解，溶剂提取，并用SPE净化后，用SPR测定。方法CCa为0.1ug/kg，CCβ为0.2ug/kg。Fermandez等开发了一种基于黄金衍射光栅表面等离子体的新型便携式六通道SPR传感器，用于牛奶样品中CAP的检测。用两种类型含聚乙二醇(PEG)的巯基烷基试剂制备形成混合自组装单分子层(m-SAM)，将芯片与半抗原蛋白共价结合，使生物功能化。将样品或标准品与特异性多克隆抗体混合，并注入传感器装置。缓冲液中CAP的LOD为0.26μg/L。牛奶样品只需5倍稀释后即可进行检测，而无须其他净化步骤。

B.电化学免疫传感器(electrochemicalimmunosensor， ECIS)

宋巍巍等以OVA-CAP偶联物为包被抗原，并将其包被到聚苯乙烯反应板上。在孵育反应中，样品中的CAP与OVA-CAP竞争结合CAP单克隆抗体，洗涤后加入碱性磷酸酶(ALP)标记的二抗，经再次孵育及洗涤后加入对硝基苯磷酸(pNPP)底物液。反应终止后用线性导数伏安法记录pNPP水解产物的氧化峰电流。实验结果表明,用免疫传感法检测CAP的灵敏度高于传统的间接竞争ELISA方法。该方法检测CAP的LOD为0.064ug/L，检测线性范围为0.15～600ug/L，测试牛奶样品的平均回收率为89.8%。另外，由于电化学免疫传感器体积较小，便于携带，操作简单，可实现牛乳样品中CAP残留的现场检测。谢东华等研制了基于CAP抗体包被Fe3O4/Au金磁纳米微粒(GMP)和三乙撑四胺铜(II)(CuL)共固定修饰平面热解石墨电极的安培免疫传感器，用于测定鱼肉中CAP含量。该免疫传感器利用外加磁场，将抗CAP-GMP吸引到CuL修饰的PRG电极表面制备而成。CuL对H2O2还原具有良好的电催化能力，当该传感器在含CAP样品液中温育后，CAP与电极表面的抗CAP的免疫结合物导致CuL对H2O2的催化还原电流(I)降低，电流下降值和CAP浓度成正比，可用于CAP定量测定。在25℃的pH6.5磷酸盐缓冲液中温育30min，该传感器对CAP的检测线性范围为0.6～110ng/mL，LOD为0.092ng/mL，添加回收率在97%～104%之间。Kim等制备了CAP的安培免疫传感器。在被黏结到导电高分子(聚TTCA)层的改性树枝状硫化镉纳米粒子(CdS)上共价固定抗CAP乙酰转移酶(抗-CAT)抗体。为了提高传感器探头的灵敏度，金纳米粒子、树枝状聚合物和CdS纳米颗粒被沉积到聚合物层。用扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)测定粒径。树枝状聚合物、CdS和抗-CAT的固定用能量破坏性分析法(EDS)、X射线光电子能谱法(XPS)和石英晶体微天平(QCM)技术证实。基于游离和标记-CAP竞争性结合抗-CAT的活性位点的免疫反应，来检测CAP含量。肼用于CAP标记，在-0.35V，可电化学催化H2O2的减少。优化条件下，该传感器在50～950pg/mL浓度范围呈良好线性，LOD为45pg/mL，并用于肉样中CAP的测定。

C.其他

Que等基于金纳米粒子(AuNP)催化4-硝基苯酚(4-NP)还原反应，开发了一种新的竞争型免疫传感系统，采用紫外-可见光(UV-vis)分光光度计检测蜂蜜和牛奶中的CAP。直径为16nm的AuNP用CAP-BSA结合物合成和官能化，被用作包被在聚苯乙烯微量滴定板(MTP)上的抗-CAP单克隆抗体的竞争物。在目标CAP存在的情况下，AuNP上标记的CAP-BSA，与目标CAP竞争结合MTP上固定的抗体。MTP上CAP-BSA-AuNP结合物随着样品中目标CAP的增多而减少。当向MTP加入4-NP和NaBH4，携带的AuNP将4-NP催化还原为4-氨基苯酚(4-AP)，而4-AP可以用UV-vis分光光度计检测。实验表明,在403nm的吸光度值会随着样品中CAP浓度的增加而增大。方法在0.1～100ng/mL范围内，呈良好线性；LOD可达到0.03ng/mL；批内、批间CV分别小于5.5%和8.0%；回收率在92%～112%之间。

Gaudin等基于CAP溶液对抗CAP多克隆抗体与传感器上固定的CAP的结合的抑制，开发了一种免疫生物传感器。响应值与样品中CAP的浓度成反比。该研究对两种不同的抗体和两个固定CAP的方法进行了比较，通过ELISA测试发现抗体质量对分析的影响很大，而且固定CAP的方法是关键点。经过优化后，该传感器可检测CAP及其葡萄糖醛酸结合物，LOD可达到0.1μg/L，整个分析时间不超过3min，并可用于胆汁、尿液和肉中CAP的测定。