3)分子印迹技术(molecularimprintingtechnology，MIT)

MIT是指为获得在空间结构和结合位点上与模板分子相匹配的聚合物制备技术，是一门源于高分子化学、生物化学、材料化学等的交叉学科。MIT就是仿照抗原-抗体的形成机理，在印迹分子(imprintedmolecule)周围形成高交联的刚性高分子，除去印迹分子后在聚合物的网络结构中留下具有结合能力的反应基团，对模板分子表现出高度的选择识别能力。

马金余等以DES为模板分子，a-甲基丙烯酸为功能单体，二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂，合成了DES分子印迹聚合物(MIP)。所得白色块状聚合物经研碎、过筛、用丙酮沉降聚合物颗粒，除去过细粉末，得到粒径为35～45μm之间的聚合物颗粒。以该MIP为填料制成SPE小柱，应用于DES残留分析的样品前处理，并比较了该MIP柱与传统C18柱对DES保留行为的差异。结果表明，该MIP柱对DES有较好的富集分离效果，对加标鸡肉样进行了含量测定，回收率为98.7%～99.6%，CV小于1.3%，且该小柱活化后能重复使用。Jiang等采用表面MIT技术合成了--种简单的氨基功能化硅胶印迹材料，用于SPE净化处理DES。与非印迹聚合颗粒相比，制备的DES-MIP吸附剂具有良好的吸附容量、显著的选择性、可结合性和快速结合动力学特征。最大静态吸附容量为62.58mg/g，在50mg/L水平的相对选择性因子值为61.7，吸附剂平衡在10min内完成。该MIP-SPE用于鱼肉中DES的测定，回收率超过87.5%，RSD小于11.6%。刘瑛等应用MIT技术，以邻苯二胺为功能单体、DES为模板，采用循环伏安法在玻碳电极表面合成了性能稳定的DES-MIP膜，并用50%乙醇溶液迅速去除模板，得到对DES响应的MIP电化学传感器。研究了此MIP传感器的分析性能，建立了以K3Fe(CN)6为电子传递媒介的间接分析法。在1.0×10-7～5.1×10-6 mol/L范围内，DES的浓度与K3Fe(CN)6的相对峰电流变化呈线性关系。选择性实验表明，此传感器对结构相似的分子有较强的抗干扰能力。

4)免疫亲和色谱(immunoffinity chromatography，IAC)

IAC以抗原抗体的特异性、可逆性免疫结合反应为基础，当含有待测组分的样品通过IAC柱时，固定抗体选择性地结合待测物，其他不被识别的样品杂质则不受阻碍地流出IAC柱，经洗涤除去杂质后将抗原-抗体复合物解离，待测物被洗脱，样品得到净化。其优点在于对目标化合物的高效、高选择性保留能力，特别适用于复杂样品痕量组分的净化与富集。

张琴等以DES为半抗原制备单克隆抗体，该抗体对DES、HES和DIS的交叉反应率分别为100%、11.36%和299.54%，IC50分别为42.54ng/mL、38.20ng/mL和14.20ng/mL。选用固定抗体的浓度约为5mg/mL凝胶与溴化氰活化的琼脂糖4B偶联，偶联率在71.64%～90%之间，制备IAC柱的动态柱容量和绝对柱容量分别为446.47～645.50ng/mL凝胶和90.47～141.10ng/mL抗体。鸡肉样品经乙醚提取，IAC净化，80%甲醇洗脱后，仪器测定。HPLC检测方法的LOD为22.2ng/g，回收率为63.7%～67.6%；GC-MS检测方法的LOD为0.33ng/g，回收率为54.1%～67.3%。

Zhang等采用IAC技术净化牛肌肉中的ZER、TAL、ZAN和a-ZOL。采用ZER的单克隆抗体与溴化氰活化的琼脂糖4B偶联(偶联率为96.3%)，制备了IAC柱，ZER、TAL、ZAN和a-ZOL的动态柱容量分别为2639.7ng/mL、2840.3ng/mL、2731.5ng/mL、2736.3ng/mL溶胶，绝对柱容量分别为406.1ng/mg、437.0ng/mg、420.2ng/mg、421.0ng/mg MAb。选择甲醇-水(30+70，v/v)为洗涤剂，甲醇为洗脱剂。20天内重复使用15次后，动态柱容量下降至1236.4ng/mL、1330.0ng/mL、1175.8ng/mL、1243.5ng/mL溶胶，仍能满足残留检测的需要。牛肉经匀质后，甲醇提取，冷冻去脂，提取液过IAC柱，然后用磷酸缓冲液、水及甲醇-水(30+70，v/v)洗涤IAC柱，甲醇洗脱，N2吹干，衍生化后，用GC-MS检测。该方法LOD为0.5μg/kg，在1.0-5.0μg/kg添加范围内，回收率为79.6%～110.7%，CV为3.2%～11.4%。王清等建立了动物源性食品中6种玉米赤霉醇类化合物残留量的复合免疫亲和柱净化、LC-MS/MS分析方法。鱼肉、肝脏、牛奶、蜂蜜经β-葡萄糖苷酸/硫酯酸复合酶酶解后用乙醚提取，提取液经氮气吹干，残渣用50%乙腈溶液复溶后过滤，滤液用PBS溶液稀释，经复合IAC柱富集净化后供LC-MS/MS检测。该方法LOD在0.04～0.10μg/kg之间，平均回收率为70.9%～95.6%，RSD为2.0%～11.8%。王昕等建立了IAC-HPLC法检测牛奶中6种玉米赤霉醇及类似物的方法。样品经IAC柱净化后，用HPLC检测。结果表明，该方法LOD均为0.05μg/L，平均回收率在54.22%～90.76%之间，CV小于9.44%。

5)固相微萃取(solid phase micro extraction，SPME)

SPME是利用待测物在基体和萃取相间的非均相平衡，使待测组分扩散吸附到石英纤维表面的固定相涂层，待吸附平衡后，再与GC或HPLC联用，分离和测定待测组分。该技术不需要使用柱填充物和有机溶剂进行洗脱，集萃取、富集和解析于一体。

邓爱妮等建立了SPME-HPLC法测定鸡肉组织和奶粉中的DES。分别考察了聚二甲基硅氧烷(PDMS，100μum)和聚丙烯酸酯(PA，85μm)两种萃取头纤维涂层对DES的萃取效果。结果表明，PA涂层萃取纤维头对DES萃取效果显著高于PDMS涂层萃取纤维头。由于DES的双酚结构，使其极性得到增强，而具有非极性的PDMS涂层萃取头主要用于非极性化合物的萃取。因此，选用适合于萃取极性化合物的PA(85um)涂层萃取头；选择30min作为最佳萃取时间；解吸时间确定为10min；在萃取溶液中不加盐；解析液为甲醇-水(70+30，v/v)，萃取液pH5.93～6.20，搅拌速度600r/min。操作步骤为:取1.0g绞碎的鸡肉试样或3.0g奶粉试样，加少量甲醇，振荡并离心，取出，上清液，0.45um滤膜过滤，放入磁力搅拌子，推动SPME装置的手柄，将萃取头(首次使用前用甲醇活化20min，室温条件下风干)浸入待测溶液内，以600r/min的速度进行搅拌萃取。萃取完成后，将萃取头转移到装有40μL流动相的自制解吸装置中静态解吸，然后将解吸液直接在230nm进行HPLC分析。该方法LOD为0.006μg/mL，测定结果的CV小于5%，应用于鸡肉组织和奶粉中DES检测，三个加标水平的回收率为81.9%～93.1%。Yang等报道了采用碳纳米管增强的中空纤维SPME(CNTs-HF-SPME)处理乳制品中DES的HPLC分析方法。中空纤维的壁孔用多壁碳纳米管(MWCNTs)填充，DES被MWCNTs选择性吸附，甲醇解吸后，HPLC测定。作者对影响CNTs-HF-SPME效果的因素，如中空纤维的长度、萃取和解吸时间、萃取温度、搅拌速度、样品溶液的pH值、有机溶剂和盐的量等，进行优化。在优化条件下，该方法LOD为5.1μg/L，回收率良好。

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