11.2.2.7 分析条件的选择

(1)三种固相萃取柱萃取效率的比较

用常用的C18固相萃取柱、OasisHLB固相萃取柱和苯磺酸型阳离子交换柱等三种固相萃取柱，对14种喹诺酮类药物的萃取效率进行了对比研究，实验结果见表11-12。从表11-12中数据中可以看出，Oasis固相萃取柱萃取效率最高，6次实验的平均回收率均在80%以上；C18固相萃取柱次之，平均回收率在70%左右；苯磺酸阳离子交换柱的平均回收率大部分在50%～70%之间，而对噁喹酸，氟甲喹两种药物来说，回收率只有4%～7%。并且OasisHLB固相萃取柱使用起来更方便，稳定性更好。因此，本方法采用OasisHLB固相萃取柱为净化柱。

表11-12 三种固相萃取柱萃取效率比较(%)

(2) 缓冲溶液pH的选择

采用固相萃取净化样品，其pH对提取效率及回收率的影响很大，不同目标物质过柱时要求其样液的pH也不同，为了找出喹诺酮类药物过OasisHLB柱时的最佳pH，用磷酸将磷酸盐缓冲溶液调至6个不同pH，然后添加相同量的标准，进行回收率实验，实验数据见表11-13，从表11-13中数据可以看出，总体上来说，14种喹诺酮类药物pH在2～4时，回收率在90%以上，而pH=3时大部分品种回收率最高；pH在5～8时，个别品种如沙拉沙星、诺氟沙星、依诺沙星回收率在85%以下。因此，本方法确定pH=3为样液过OasisHLB固相萃取柱时的最佳pH。

表11-13 不同pH的缓冲溶液过OasisHLB柱时对回收率(%)的影响

(3) 洗脱液的选择

为了找出从OasisHLB固相萃取柱上洗脱喹诺酮类药物的最佳洗脱液，配成不同比例的10个甲醇水和甲醇+氨水(19+1，v/v)溶液。每个洗脱液取5mL，进行洗脱回收率实验，其实验数据见表11-14。从表11-14中的数据可以看出，10%～30%甲醇水溶液不能从OasisHLB柱上洗下喹诺酮类药物，从40%到80%甲醇水溶液洗脱效率依次增加，但差异很大，如沙拉沙星、环丙沙星、氧氟沙星、依诺沙星、达氟沙星、诺氟沙星、麻保沙星，用5mL 80%甲醇水就能完全洗脱下来，而氟甲喹、二氟沙星、噁喹酸只能被洗脱下0.2%～8.1%。用5mL甲醇作洗脱剂这三种喹诺酮类药物也只能洗出70%～80%。而用5mL甲醇+氨水溶液(19+1，v/v)作洗脱液，能将14种喹诺酮完全洗脱下来，所以选择用30%甲醇水溶液先洗去部分的干扰物后，再用甲醇+氨水溶液(19+1，v/v)洗脱吸附在OasisHLB固相萃取柱上的喹诺酮类药物。

表11-14 不同配比的洗脱液对回收率(%)的影响

(4) 质谱条件的优化

采用注射泵直接进样方式，以5uL/min将每种5uL/mL的喹诺酮标准溶液分别注入离子源中，在正离子检测方式下对每种喹诺酮进行一级质谱分析(Q1扫描)，得到每种喹诺酮的分子离子峰，对每种喹诺酮的准分子离子峰进行二级质谱分析(子离子扫描)，得到碎片离子信息，然后再对得到的每种喹诺酮的二级质谱对去簇电压(DP)，碰撞气能量(CE)、电喷雾电压、雾化气和气帘气压力进行优化，使每种喹诺酮的分子离子与特征碎片离子产生的离子对强度达到最大时为最佳，得到每种喹诺酮的二级质谱图，见图11-3。

图11-3 十四种喹诺酮二级质谱图

从图11-3中选择每种喹诺酮的定性离子对和定量离子对，将液相色谱和串联四极杆质谱仪联机，再对离子源温度、辅助气流速进行优化，使样液中每种喹诺酮的离子化效率达到最佳。

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