12.2.5.1 适用范围

适用于牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。方法检出限：牛奶中土霉素、四环素为5μg/kg、金霉素、强力霉素为10 ug/kg。奶粉中土霉素、四环素为25 μg/kg、金霉素、强力霉素为50 ug/kg。

12.2.5.2 方法原理

用0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取牛奶和奶粉中四环素族抗生素残留，Oasis HLB或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化，液相色谱仪测定，外标法定量。

12.2.5.3 试剂和材料

甲醇、乙腈：色谱纯；磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)、柠檬酸(C6H8O7·H2O)、 乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA·2H2O)、草酸(C2H2O4·2H2O)： 分析纯。

0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液：称取71.63 g磷酸氢二钠，用水溶解，定容至1000 mL。

0.1 mol/L柠檬酸溶液：称取21.04g柠檬酸，用水溶解，定容至1000 mL。

Mcllvaine缓冲溶液：将625 mL 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液与1000 mL 0.1 mol/L柠檬酸溶液混合，必要时用NaOH或HCI调pH=4.0±0.05。

0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取60.50g乙二胺四乙酸二钠(4.5) 放入1625 mL mellvaine缓冲溶液中，使其溶解，摇匀。

0.01 mol/L草酸溶液：称取1.26g草酸，用水溶解，定容至1000 mL。

甲醇-水(1+19，v/v)：量取5 mL甲醇与95 mL水混匀。

0.01 mol/L草酸-乙腈溶液(1+1，v/v)： 量取50 mL草酸溶液与50 mL乙腈混匀。

土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质：纯度大于等于96%。

0.1 mg/mL土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备溶液：准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质，分别用甲醇配成0.1 mg/mL的标准储备液。储备液于-20℃保存。

土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准工作溶液：根据需要用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备液稀释成所需浓度的混合标准工作溶液，储存于冰箱中，每周配制。

Oasis HLB固相萃取柱或相当者： 500 mg， 6 mL。使用前分别用5 mL甲醇和10 mL水预处理，保持柱体湿润。
羧酸型阳离子交换柱： 500 mg，6mL。 使用前用5 mL甲醇预处理，保持柱体湿润。

12.2.5.4 仪器和设备

液相色谱仪：配有紫外检测器；分析天平：感量0.1 mg，0.01g； 涡旋振荡器；冷冻离心机：转速大于5000 r/min；固相萃取装置；真空泵；氮气吹干仪； pH计：测量精度士0.02；刻度样品管： 10 mL，精度为0.1 mL。

12.2.5.5样品前处理

(1)试样制备

将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用。牛奶置于0～4℃冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。

(2)提取

牛奶试样称取10g (精确到0.01 g)，置于50 mL具塞塑料离心管中。奶粉试样称取2g(精确到0.01 g)，置于50 mL具塞塑料离心管中。向试样中加入20 mL 0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液，于涡旋振荡器上混合2min，于10℃ ，5000 r/min离心10 min，上清液过滤至另一离心管中。残渣中再加入20 mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液。

(3)净化

将上清液通过处理好的Oasis HLB柱，待上清液完全流出后，用5 mL甲醇-水淋洗，弃去全部流出液。减压抽干5min，最后用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL样品管中。

将收集的洗脱液通过羧酸型阳离子交换柱，待洗脱液全部流出后，用5 mL甲醇洗柱，减压抽干，用4 mL 0.01 mol/L草酸-乙腈溶液洗脱，收集洗脱液于10 mL样品管中，45℃氮气吹至1.5mL左右，流动相定容至2mL，供液相色谱-紫外检测器测定。

百检网就是一家权威的食品检测机构，提供各种检测需求服务，有任何疑问欢迎电联或者在线咨询客服。