13.2.1.5 样品前处理
 
(1)猪肾和肌肉组织样品
 
1)试样制备
 
猪肾要去除脂肪和其他的非肾脏组织,猪肉要去皮和骨头。将其搅碎拌匀。分出0.5kg作为试样,将制备好的试样密封,并作上标记。将试样置于-18℃条件下贮存。
 
2)提取
 
称取试样2.00g (精确到0.01g)放入50mL聚丙烯离心管中,加入200μL乙腈进行涡流混合,混合后加入400 μL 5 mol/L氢氧化钠溶液,并进行涡流混合30s。在80℃±5℃水浴中放置1h。在此期间,要对每个测定样品进行两次涡流混合。1 h后,将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12 mL特丁基甲醚,置于振荡器.上高速振荡15 min,离心15min (转速为4000 r/min)。吸出.上清液,定量将特定基甲醚转移到干净的15 mL的玻璃离心管内,待净化。
 
3)净化
 
在上述15mL离心管中加入1mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3) 3mL,振荡10 min,离心10 min(4000 r/min)。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2mL特丁基甲醚,振荡5 min,离心5 min (4000r/min),吸出特丁基甲醚层弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1mL 5mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10mL特丁基甲醚,振荡15 min,离心5 min(4000r/min)。定量吸取特丁基甲醚转移到一个干净的10mL的离心管中。在40℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000 uL流动相溶液,进行涡流混合,超声处理10 min。用0.2um×13mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液,将样液转移到试样瓶中,供液相色谱-串联质谱测定。
 
(2)牛奶和奶粉样品
 
1)试样制备
 
将牛奶和奶粉样品分别混合均匀。各自分出0.5kg作为试样,将分出的试样密封,并作上标记。将试样置于4℃条件下贮存。
 
2)提取
 
牛奶样品:称取牛奶试样2.00 mL精确到0.01 mL,放入50 mL聚丙烯离心管中,加入200uL乙腈进行涡流混合,混合后加入400 μL 5mol/L氢氧化钠溶液,并进行涡流混合30s。在80℃±5℃水浴中放置1 h。在此期间,要对每个测定样品进行两次涡流混合。1h后,将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12mL特丁基甲醚,置于振荡器上高速振荡15min,离心15min(转速为5000 r/min)。吸出.上清液,将特丁基甲醚定量转移到干净的15mL的玻璃离心管内,待净化。
 
奶粉样品:称取奶粉样品0.25 g(精确到0.01g),放入50mL聚丙烯离心管中,加入1.75g水超声溶解得到复原乳,加入200 uL乙腈,其余提取步骤同牛奶样品。
 
3)净化
 
在上述15mL离心管中加入1mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3)3mL,振荡10 min,离心10 min (5000 r/min)。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2mL特丁基甲醚,振荡5 min,离心5min(5000 r/min),吸出特丁基甲醚层弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1mL 5mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10 mL特丁基甲醚,振荡15 min,离心5 min(5000r/min)。定量吸取特丁基甲醚转移到一个干净的10mL的离心管中。在40℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000 μL流动相溶液,进行涡流混合,超声处理10 min。用0.2μm×13mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液,将样液转移到试样瓶中,供液相色谱-串联质谱测定。