13.1.4.2 测定方法

(1)毛细管电泳法(capillary electrophoresis， CE)

毛细管电泳分离技术分辨率高、分离效率高、样品用量小、分离速度快，在残留分析中有一定的应用，但其准确性和灵敏度不如高效液相色谱(HPLC)，同时必须带电荷的物质才可以用毛细管电泳测定，存在一定的限制性。巴比妥类、苯二氮卓类、吩噻嗪类和丁酰苯类，都具有酸碱性，理论上都可以用毛细管电泳分析。

岳美娥等采用毛细管区带电泳同时测定尿液中苯巴比妥、巴比妥、巴比妥酸、戊巴比妥、硫代巴比妥酸、丁巴比妥、异戊巴比妥、环已烯乙烯基巴比妥酸和N-甲基苯乙烯基巴比妥酸等9种巴比妥类药物。以含4 mg/mL β-环糊精、2 mg/mL a-环糊精的20 mmol/L硼砂(pH 10)为基础电解质，分离电压为25kV，操作温度为25℃，200nm波长下紫外检测。研究发现，在高pH下，酸性分析物解离程度增大，负电荷增多，表观电泳迁移率降低，出峰时间延长； pH 9.5时分析物在较短时间内取得基线分离。综合考虑迁移时间和分离度，选择pH 10.0。方法LOD为0.8～3.5 μg/mL，各巴比安类药物回收率在86.8%～101.4%之间。Wang等测定尿液中巴比妥类药物，60 mmol/L pH 11.0甘氨酸NaOH为基础电解质，10 mmol/L pH 5.5甘氨酸-HCl为上样缓冲液，司可巴比妥为内标，分离电压12.5kV，进样条件：1.4psi、 10s；毛细管长60.2cm，直径75um，检测波长214nm。方法LOD为0.26～0.27μg/mL，LOQ为0.87～0.92μg/mL；巴比妥回收率为90.27%～106.36%，苯巴比妥回收率为93.05%～113.60%。

Bechet等建立了一-种检测苯二氮卓类药物的毛细管胶束电动色谱法。分离缓冲液包括甘氨酸和三乙醇胺水溶液(pH9.0)，SDS、甲醇、甘氨酸、三乙醇胺的浓度对于迁移时间和分辨率的影响也得到研究。10种苯二氮卓类药物在25 mmol/L SDS、20%(v/v)甲醇、75mmol/L甘氨酸-250mmol/L三乙醇胺缓冲液中分离良好。在浓度为10 mmol/L时，迁移时间的日间CV为0.3%～0.5%，峰面积的CV为1.7%～1.9%；方法LOD和LOQ分别为0.2 μg/g和0.7 μg/g。杨晓云等建立了检测异丙嗪和氯丙嗪的CE-安培检测方法。该方法线性范围为5×10-6～5×10-4mol/L， LOQ为1.5 mg/L，但未对实际样品进行分析。

(2)气相色谱法(gas chromatography，GC)

镇静剂类药物大多含有氯、氮、氧等原子，极性相对较低，可以用GC检测，检测器可选用火焰离子化检测器(flame ionization detector，FID)、氮磷检测器(nitrogen phosphorus detector，NPD)或电子捕获检测器( electron capture detector，ECD)等。

Catalina等用GC-FID检测血液中苯巴比妥、戊巴比妥和仲丁巴比妥。样品净化后，不衍生直接进GC分析。脉冲不分流模式进样，毛细管色谱柱分离，程序升温，氦气为载气，FID检测，采用阿普比妥为内标定量。3种巴比妥类药物的LOD在2.77～6.9 μg/kg之间。

Guan等采用GC-ECD检测尿液中9种苯二氮卓类药物，样品经水解后，不需要衍生，直接GC测定。方法LOD在2～20ng/mL之间，CV为10%～17%。张玉洁等利用气相色谱-微电子捕获检测器(GC-uECD)检测猪肉中地西泮残留，无需衍生，外标法进行定量，结果在1～1000μg/kg范围内线性良好，相关系数达0.9994，平均回收率为83.5%～94.9%，日内CV为2.4%～8.1%，日间CV为3.9%～6.4%。邢丽梅建立了测定血浆及尿液中氟硝西泮代谢物(7-氨基氟硝西泮)、氯硝西泮代谢物(7-氨基氯硝西泮)及硝西泮代谢物(7-氨基硝西泮)的GC-ECD分析方法。加入七氟丁酸酐及催化剂4-吡咯基吡啶，在室温下进行全氟烷化反应，反应完全后，用碱液洗去过量酰化试剂，进行GC-ECD分析。方法LOD低于1ng/mL，回收率在97.4%～103.2%之间。Ugland等应用GC-NPD检测血液和尿液中地西泮和去甲地西泮。样品不衍生测定，LOD可达到0.02nmol/mL和0.115 nmol/mL；尿液和血液中去甲地西泮LOQ分别为0.07nmol/mL和0.380nmol/mL；血液中地西泮LOQ为0.08nmol/mL；回收率为84%～102%。

陈国征等用GC-NPD测定尿中盐酸氯丙嗪。用乙酸乙酯为萃取剂，通过LLE尿液中微量盐酸氯丙嗪，样品无需衍生，在DB-1701石英弹性毛细管柱上分离，NPD测定。方法LOD为0.05μg/mL，CV为3.05%～4.15%，加标回收率为98.1%～101%。