15.1.4.2测定方法

喹噁啉类药物的测定方法主要包括仪器测定和免疫测定方法。免疫学分析方法较为简单、快速、灵敏度高，但缺乏定性信息，一般作为初筛方法；而色谱方法定量准确，特别是色谱-质谱联用技术在定量的同时，还能定性分析，但所需的仪器昂贵。

(1)气相色谱(gas chromatography，GC)

喹噁啉类药物及其代谢物沸点高，难以气化，不能直接用GC进行分析。喹噁啉类原药很难衍生转化为沸点低的物质，但QCA和MQCA为羧酸类结构，可以通过酯化或硅烷化衍生后，利用GC分析检测。我国出入境检验检疫行业标准SNT 1016.1- 2001规定了出口肉及肉制品中CBX代谢物QCA残留量的GC检验方法。提取的QCA用甲醇-硫酸(97+3，v/v)在60℃水浴中甲酯化衍生30min，衍生物用GC-电子捕获检测器(ECD)测定，外标法定量。该方法的LOQ为30 μg/kg，回收率为70%～120%。由于该方法灵敏度已不能满足需要，现已不采用。

(2)气相色谱-质谱法( gas chromatography-mass spectrometry， GC-MS)

GC-MS利用分析物母离子或子离子的结构、分子量等信息，确证分析物，结果准确可靠，而且比GC方法具有更高的灵敏度，但GC-MS测定本类药物也需要衍生反应，操作较为繁琐。

Della等建立了气相色谱-电子捕获负化学离子源-质谱(GC-ECNI-MS)检测猪肝中CBX主要代谢物QCA的方法。提取物用N-(特丁基二甲基硅)-N-甲基三氟乙酰胺(N-methyl-N-tertbutyldimethy-Isilyltrifluoroacetamide，MTBSTFA)与1%叔丁基二甲基氯硅烷(tert-butyldimethylchlorosilane，TMSDAM)在70℃硅烷化衍生30min，冷却后用异辛醇定容，进GC分析，采用同位素内标[2H4]QCA定量。GC分离采用DB-5 MS毛细管柱(30m×0.25mmi.d，0.25um)，起始温度80℃，以10℃/min升至300℃，维持1min，进样口温度250℃，不分流进样，进样量2μL，质谱接口温度280℃，源温和分析器温度为150℃，发射电流～50A，ECNI方式电离，采集负离子，选择离子(SIM)模式检测。

该方法回收率为90%～102%，CV小于1.7%～8.4%，LOQ为0.7μg/kg。该研究小组还将净化后的QCA用三甲基硅烷基重氮甲烷(trimethylsilyldiazomethane，TMSD)于60℃甲基化衍生1h，再GC-MS分析，与TMSDAM衍生方法相互印证。两种方法的结果类似，但TMSD属易燃物品，操作要注意安全。彭艳等用GC-MS检测动物肌肉、肝脏及肾脏中QCA的含量，衍生化条件与Della相同，GC分离采用HP-5 MS(30m×0.25 mm i.d.，0.25um)，起始温度80℃，以10℃/min升至280℃，维持1min，进样口温度250℃，不分流进样，进样量2μL，质谱接口温度280℃，源温和分析器温度为150℃，负化学电离源电离(NCI)， SIM模式检测。方法回收率为90%～ 102%，CV小于8.5%；LOQ为0.7μg/kg，LOD为1.0μg/kg。Lynch等建立了猪肝脏中CBX及其代谢物QCA的GC-离子阱质谱(MSn)检测方法。提取物也采用MTBSTFA与1% TMSDAM在70℃硅烷化衍生30min，再GC-NCI-MSn检测，QCA同位素内标定量。方法回收率接近100%，CV小于7.1%，LOD为2μg/kg。

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