(4)液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

LC-MS是近年来迅速发展起来的一种痕量监测分析技术，它将HPLC的高效分离能力与质谱的准确定性、鉴别能力结合在-起，实现多种组分的同时分离测定，可以大大缩短分析时间，提高分析测定的灵敏度和准确性。尤其是逐步发展起来的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)能在取得良好的分析效果的同时，进-步减少溶剂用量，缩短分析时间。

1)液相色谱-单四极杆质谱法(LC-MS)

早期测定动物组织中BMZs残留多采用液相色谱-单四极杆质谱仪(LC-MS)，其常为热喷雾电离(TSP)接口、选择离子(SIM)模式。这种设备的缺点是其应用局限于有一定挥发性、分子量较小的分子，而且需要质谱诊断的离子数量多，TSP的质谱图化学噪声高。Blanchflower等建立了LC-TSP-MS测定组织中FBZ和OFZ残留的方法。用甲醇-水(2+7，v/v)从肝脏和肌肉组织中提取FBZ和OFZ，提取液用石油醚洗涤，磷酸缓冲液稀释，乙醚-乙酸乙酯(60+40，v/v)萃取，萃取液蒸干，流动相复溶后，LC-TSP-MS测定。分析柱为LiChrosorb RP18反向柱(125mm×4mm)，OFZ流动相为含有0.05mol/L乙酸铵的乙腈-四氢呋喃-水(5+1+4，v/v)，FBZ流动相为含有0.05mol/L乙酸铵的乙腈-四氢呋喃-水(3+1+6，v/v)，流速为1.0mL/min，SIM模式监测，选择离子为[M+H]+。FBZ和OFZ的平均回收率分别为91%和86%，LOD分别为0.05μg/g和0.1μg/g。研究发现，与梯度洗脱相比，等度洗脱能提供更多可重复的MS结果。Cannavan等用LC-TSP-MS测定了牛肉中TBZ和TBZ-5-OH残留。色谱柱为Prodigy5 ODS 3(150mm×4.6mm，2um)，采用0.1mol/L乙酸铵和乙腈作为流动相，梯度洗脱，流速1.0mL/min。用氘代TBZ为内标，SIM模式监测，选择离子为[M+H]+，分别扫描m/z为202、206和218的离子对，测定TBZ、D4-TBZ和TBZ-5-0H。该方法能够确证50μg/kg的TBZ和TBZ-5-OH，TBZ和TBZ-5-OH的回收率分别在96%～103%和70%～85%之间，CV分别为0.7%～4.8%和3.1%～11.5%。该作者还采用大气压化学电离(APCI)方式进行确证，发现APCI能产生四个特征离子，更适合于确证。

2)液相色谱-四极杆串联质谱法(LC-MS/MS)

最近十多年来，串联质谱(MS/MS)的应用极大提高了生物样品中BMZs残留检测和确证的能力，大多采用三重四极杆质谱，多反应监测(MRM)模式监测。

陈莹等采用UPLC-MS/MS建立了同时测定动物组织中噻苯哒唑、奥芬哒唑、甲苯咪唑、三氯苯哒唑和氟苯哒唑等5种BMZs的残留检测方法。色谱柱为C18柱，流动相为含0.1%甲酸的乙腈溶液和0.1%甲酸，梯度洗脱，流速为0.3mL/min，电喷雾(ESI)电离，MRM模式监测。方法LOD为0.1～0.5ug/kg，LOQ为0.2～0.7μg/kg。田德金等采用UPLC-MSMS方法检测动物组织中的FLU、FBZ、ABZ和MBZ。采用乙酸乙酯做提取剂，提取液浓缩后，用乙腈复溶，正己烷脱脂，然后过中性氧化铝柱净化，UPLC-MS/MS测定。色谱柱为C18柱，水和乙腈为流动相，梯度洗脱，流速0.25mL/min，ESI正离子、MRM模式监测。方法回收率为60%～85%，平均CV小于15%，LOQ为1μg/kg。郭强等建立了可食性动物组织中阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、噻苯咪唑、5～羟基噻苯咪唑、奥芬达唑砜等7种BMZs药物及其代谢物的多残留检测的LC-MS/MS法。分析过程中以保留时间和2个MRM离子对(母离子和2个子离子)进行定性，以峰形好和响应值高的离子进行定量。结果表明，该方法的LOD为2ng/mL，LOQ为10 ng/mL，准确度和精密度都能满足残留检测的要求。De Ruyck等采用LC-MS/MS方法检测羊肝脏中MBZ及其水解产物(MBZ-OH)和次级代谢物(MBZ-NH2)。色谱柱为反相C18柱，流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈，梯度分离，ESI+电离，以[M+H]+离子作为检测目标，采用MRM定量。方法LOD低于1μg/kg，回收率高于90%，RSD在5%～11%之间。刘琪等建立了猪肝中14种BMZs及其代谢物的LC-ESI-MS/MS检测方法。用碱性乙酸乙酯提取，蒸干后用乙醇-0.1moL/L盐酸溶液(2+1，v/v)复溶，MCX SPE柱净化，LC-MS/MS测定。用Waters Xterra C18(2.1mm×150mm，5um)色谱柱分离，以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.2mL/min，ESI+、MRM模式检测。14种BMZs及其代谢物的标准溶液在10～1000μg/L浓度范围内线性关系良好，R2均大于0.99；方法LOD为5ug/kg，LOQ为10μg/kg；在10～200μg/kg添加浓度范围内，回收率均在70%～120%之间，批内、批间RSD均小于20%。

De Ruyck等建立了鸡蛋中FLU及其代谢物(FLU-HMET 和FLU-RMET)的LC-MS/MS检测方法。用碱化的乙酸乙酯作为提取液，提取液在60℃蒸至4～5mL，转至刻度试管，氮气吹干，残渣溶于600μL甲醇，混匀后在60℃水浴中加热5min，用2mL正己烷脱脂1～2次，溶液再用甲醇定容至1mL，并在60℃水浴中加热2min，过0.2μm聚四氟乙烯滤膜，LC-MS/MS测定。色谱柱为RP-C18柱，乙酸铵缓冲液和乙腈为流动相，梯度洗脱，流速0.25mL/min，进样量10μL，ESI+电离，以[M+H]+离子作为检测目标，采用MRM确证，以氯苯并咪唑作为内标，制作基质加标标准曲线定量。方法LOQ约为1μg/kg，总体平均回收率大于77%。

De Ruyck等还建立了检测牛奶中8种驱虫药(包括TBZ、OFZ、FBZ、OXI、ABZ、FEB和TCB)的LC-ESI-MS/MS多残留检测方法。色谱柱为C18柱，0.1%甲酸和乙腈为流动相，梯度洗脱，ESI电离，监测[M+H]+离子，用MRM确证，并计算了1μg/kg(禁用药)和MRL值(限用药)添加水平的检测限(CCa)和检测能力(CCβ)。方法LOD小于0.6μg/kg，回收率在89.6%～102.0%之间，CV在5.4%～11.6%之间。汤娟等建立了LC-MS/MS测定全脂和脱脂奶粉中奥芬达唑、阿苯达唑和芬苯达唑3种BMZs残留的方法。通过比较不同溶液的提取效率，最终选择含1%乙酸的甲醇作为提取溶液，正己烷和阳离子SPE两步净化，有效去除奶粉基质中的抑制干扰物。以乙腈和含0.5mmol/L醋酸铵及0.1%甲酸的水溶液为流动相，C18作为分析色谱柱，采用梯度洗脱方式进行LC分离。脱脂奶粉和全脂奶粉3个添加水平的回收率范围为70.0%～85.8%，RSD均小于7.5%，方法LOD为10μg/kg，能满足现有各国残留限量要求。

Wojnicz等开发了一种简单快速的LC-MS/MS方法测定血浆中的ABZ及其代谢物ABZ-SO2。样品经SPE提取净化后，以1%乙酸溶液-甲醇(4+6，v/v)为流动相，在Zorbax XDB-CN柱上等度洗脱，ESI电离，MRM模式监测。ABZ和ABZ-SO2的LOQ分别为5和10ng/mL，在LOQ添加水平下，RSD不超过20%。

Whelan等采用LC-MS/MS在MRL水平对TCB残留进行了定量和定性分析。采用改进的QuEChERS方法提取TCB残留，ESI质谱分析。常见流动相添加物由于pK。值小于2，造成电离不充分，从而导致线性较差，而使用含有三氟乙酸(pK。0.3)的流动相，形成了TCB代谢产物的质子化准分子离子[M+H]+，可以对肝脏、肌肉和牛奶中TCB残留在欧盟MRL(分别为250μg/kg、225μg/kg和10μg/kg)下进行确证分析。所有待测物在2.23min内出峰；牛奶和组织中动态线性范围分别为1～100μg/kg和5～1000μg/kg；肝脏、肌肉和牛奶中CCa范围分别为250.8～287.2μg/kg、2554.9～290.8ug/kg和10.9～12.1μg/kg。

3)液相色谱-离子阱质谱法(LC-MSn)

从20世纪80年代中期开始，离子阱开始成为有机质谱的质量分析器。单一-的离子阱在空间上用于较大范围内不同质荷比离子的检测，在时间上又可以用于串联质谱，灵敏度较四极杆质量分析器高10～1000倍。与四极杆串联质谱的不同之处在于四极杆串联质谱是“空间上”的串联，而离子阱质谱是“时间上”的串联。Kai 等建立了检测动物组织中ABZ、FBZ、ABZ-NH2-SO2、MBZ、OXI、TBZ、TBZ-5-OH、TCB和5-氯-6-(2，3-二氯-苯氧基)-苯并咪唑-2-环戊酮等9种BMZs的LC-MSn方法。用Discovery HS F5五氟苯基键和相色谱柱分离，流动相为0.2%甲酸-乙腈(50+50，v/v)，等度洗脱，流速0.2mL/min；LC-MSn在ESI电离、增强离子扫描(EPI)、MRM模式下监测。该方法的LOD为0.005～0.05ng/g。

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