2)荧光检测衍生化

Perez-Ruiz等在强碱条件下用5-碘代乙酰胺基荧光素(5-iodoacetamidofluorescein，5-IAF)对硫脲嘧啶类药物进行衍生化反应，产生荧光物质后(图19-5)，采用激光介导的荧光检测器(LIFD)检测。作者对硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液在pH8.0～13.0条件下的衍生化效率进行比较发现，硫脲嘧啶、苯基硫脲嘧啶衍生物的荧光强度均随着pH的增高而增强，并且没有观测到平高线。选择pH 12.5作进一步研究，发现硼酸盐缓冲液对硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶的衍生化最佳。接着对50～500mmol/L浓度的硼酸盐缓冲液进行比较，300mmol/L硼酸盐缓冲液对两种分析物的衍生效果最佳。作者还对25μL衍生化试剂5-IAF在1×10-3～1mmol/L浓度范围的衍生化效率进行了比较，当5-IAF浓度超过0.45mmol/L后，衍生化效率随着浓度的增加而降低(图19-6)。同时，25μL 4mmol/L的5-IAF具有较低的背景值。衍生反应30min后，两种分析物的峰强度开始缓慢下降。此时衍生化效率接近42%。

图19-4 Cu(I)催化的发光氨与双氧水之间的化学发光反应示意图

图19-5 5-IAF与硫脲嘧啶类药物衍生化反应示意图