显微镜是研究微生物必不可少的工具。自从发明了显微镜后，人们才能观察到各种微生物的形态，从此揭开了微生物世界的奥秘。随着科学技术不断发展，显微镜可利用的光源已从可见光扩展到紫外线，接着又出现了利用非光源的电子显微镜，从而大大提高了显微镜的分辨率。借助各种显微镜，人们不仅可以观察到真菌、细菌的形态和构造，还能清楚地观察到病毒的形态和构造。

当今微生物实验室中最常用的还是普通光学显微镜，我们要学会正确使用和保养普通光学显微镜。普通光学显微镜由机械装置和光学系统两部分组成(图4-3)。

图4-3普通光学显微镜的构造
(虚线条代表光学系统，实线条代表机械装置)

(一)低倍镜观察

镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置。

1.调节光源将低倍物镜转到工作位置，上升聚光器将可变光阑完全打开，然后转动反光镜采集光源，一般以采集射人的自然光为宜，不宜采用直射日光。如遇阴天或晚上，可用普通日光台灯照明。当用显微镜灯(钨丝灯泡)照明时，因其亮度较强，而且发射光谱中有较多刺激眼睛的红光，故应根据标本染色情况选用绿色、黄绿或蓝绿色滤光器或一面磨砂的滤光片，以减弱光的强度，同时，又可吸收掉红光，使视野光线柔和，并可保护眼睛。旋转反光镜，使光线投射到反光镜中央，并调节聚光器或调节光圈大小，使视野得到均匀的照明。

2.调节聚光器和物镜数值孔径相一致取下目镜，直接向镜筒内观察，先将可变光阑缩到最小，再慢慢打开，使聚光器的孔径与视野的直径一样大，然后再放回目镜，这一操作的目的是使入射光所展开的角度与镜口角度相符合。否则因光圈开的太大而超过物镜的数值孔径时会产生光斑，如光圈收得太小，则降低分辨率，从而影响了物像的清晰度，因为各物
镜的数值孔径不同，所以每转换一次物镜都要进行调节。

在实际操作中观察往往只根据视野的亮度和标本明暗对比度来调节光圈大小，而不考虑聚光器与物镜数值孔径的配合，只要能达到较好的效果，这种调节法也是可取的。但是，对于使用显微镜的工作者来讲，必须了解这一操作的目的和原理，这样在操作时就能运用自如。

3.放置标本上升镜筒，将细菌染色图片放在镜台上，用玻片夹住，然后降下低倍物镜，使其下端接近于玻片。

4.调焦转动粗调节螺旋，使镜筒逐渐上升到看见模糊物像时，再转动细调节螺旋，调节到物像清晰为止。

(二)高倍镜观察

1.寻找视野将在低倍镜下找到的合适部位移至视野当中。

2.转换高倍镜用手按住转换器慢慢地旋转，当听到“咔嚓”一声即表明物镜已转至正确的工作位置上。

3.调焦使用齐焦物镜时，只要从低倍转到高倍，再稍调一下细调节螺旋就可看清物像。如用不齐焦的物镜时，每转换一次物镜都要进行调焦，即先使物镜降至非常靠近玻片的位置，然后再慢慢上升镜筒，并细心调节粗、细调节螺旋，直至物像清晰为止。

(三)油镜观察

油浸物镜的工作距离(指显微镜前透镜的表面到被检物体之间的距离)很短，一般在0.2mm以内，再加上一般光学显微镜的油浸物镜没有“弹簧装置”，因此，使用油浸物镜时要特别细心，避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使物镜受损。

1.找合适的视野先用低倍镜寻找合适的视野，并将欲观察的部位移到视野中央。

2.转换油镜将油镜转到工作位置。

3.调节聚光器与油镜数值孔径相一致只要将聚光器上升到最高位置、可变光阑开到最大时，两者的数值孔径即达到一致。

4.加香柏油从双层瓶的内层小瓶中取香柏油1～2滴加到欲观察部位涂片上(切勿加多)，然后将油镜转到工作位置，下降镜筒，使油镜浸入香柏油中，并从侧面观察，使镜头降至既非常接近玻片，又不与玻片相撞的合适位置。

5.调焦左眼从目镜中观察，同时，转动粗调节螺旋，缓慢提升油镜，至出现模糊的物像时，再用细调节螺旋调节至物像清晰为止。如按上述操作还找不到目的物，一种可能是油镜下降还不到位，另一种可能是油镜上升太快，以致眼睛捕捉不到一闪而过的物像，遇此情况，应重新操作。

(四)显微镜用毕后的处理

(1)上升镜筒，取下玻片。

(2)清洁显微镜。

清洁油镜：先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用蘸少许乙酸-酒精混合液(V乙醚：V纯酒精=2：3)或二甲苯的擦镜纸擦掉残余的香柏油，最后再用干净的擦镜纸抹去残留的二甲苯等。

清洁目镜和其他物镜：可用干净的擦镜纸擦净。

清洁机械部分：用柔软的绸布擦净机械部分的灰尘。

(3)搁置物镜。将物镜转成“八字”式，缓慢下降镜筒，使物镜靠在镜台上，将聚光器降至最低位置，反光镜镜面转成垂直状。

(4)去除细菌涂片上的香柏油。加2～3滴二甲苯于涂片上，使香柏油溶解，再用吸水纸轻轻压在涂片上吸掉二甲苯和香柏油。这样处理不会损坏细菌涂片，并可保存以供以后再观察。如不需要保留涂片，可用肥皂水煮沸后再清洗干净。