不同种类微生物的代谢途径及代谢产物不同，可利用一些生化反应来测定这些代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其他方面不易区别的微生物，微生物生化鉴定是微生物分类鉴定中的重要依据之一，目前，多采用商品化的成套生化试剂盒来完成生化鉴定试验，所以本书只着重介绍各类生化反应的原理，试验方法若与试剂盒方法存在差异，以试剂盒方法为准，如需了解试剂配制请参见相关国家标准。

糖苷醇类代谢试验

1.三糖铁(TSI)琼脂试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

试验方法：以接种针挑取待测菌涂布于斜面并穿刺接种，置(36±1)℃培养18～24h，观察结果见彩图1。

本试验可同时观察乳糖、葡萄糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，产生硫化氢(变黑)。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红色，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。

2.邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)试验 ONPG是乳糖的结构类似物，无色的ONPG经β-半乳糖苷酶水解后生成黄色的邻位硝基酚。迅速或迟缓分解乳糖的细菌如埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属等为阳性。而不发酵乳糖的细菌如沙门氏菌、变形杆菌等均为阴性。

3.V-P试验 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧气氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P(+)反应。

试验方法：

(1)O'Meara氏法。将试验菌接种于通用培养基，于(36±1)℃培养48h，培养液1mL加O'Meara试剂(加有0.3%肌酸或肌酸酐的40%氢氧化钠水溶液)1mL，摇动试管1～2min，静置于室温或(36±1)℃恒温箱，若4h内不呈现红色，即判定为阴性。亦有主张在48～50℃水浴放置2h后判定结果者。

(2)Barritt氏法。将试验菌接种于通用培养基，于(36±1)℃培养4d，培养液2.5mL先加入a-萘酚纯酒精溶液0.6mL，再加40%氢氧化钾水溶液0.2mL，摇动2～5min，阳性菌通常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或(36±1)℃恒温箱，如2h内仍不显现红色，可判定为阴性。

(3)快速法。将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5% a-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。

本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽孢杆菌和葡萄球菌和其他细菌时，通用培养基中的磷酸盐会阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去，或以氯化钠代替。

4.甲基红试验(MR) 肠杆菌科各属细菌都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等各种酸性产物，可使培养基pH下降至4.5以下，使甲基红指示剂变红。

试验方法：挑取新鲜纯培养物少许，接种于MR-VP培养基，于(36±1)℃或30℃(以30℃较好)培养3～5d，从第二天起，每日取培养液1mL，加甲基红指示剂1～2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色，见彩图2。发现阳性或至第五天仍为阴性，即可判定结果。

甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.4～6.0，其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度增强而增强红色，在pH5.0以上，则随碱度增强而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。

5.七叶苷水解试验 某些细菌能水解七叶苷生成七叶素与培养基中枸橼酸铁的亚铁离子起反应，生成黑色的化合物，使培养基变黑。例如，克雷伯菌属、肠杆菌属和沙雷菌属、单增李斯特能水解七叶苷，肠球菌属和D群链球菌也能水解七叶苷，并耐受胆汁。

文章来源：《农产品质量安全检测》

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