菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。一般需要2～3代的复壮过程，让菌种逐渐适应培养环境。对于不同的保存方式，活化的方式也不同。

(1)传代培养保藏法的菌种复苏较简单，直接转接即可。

(2)液态石蜡法保存的菌种复苏时，用接种环从石蜡油下面挑取少量菌体，并在管壁上轻轻碰几下，尽量使油滴尽，再转接到适宜的新鲜培养基上。由于菌体外沾有石蜡油，生长较慢且有黏性，故一般需要再移植一次才能得到良好的菌种。从液态石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上灭菌时，要先烤干再灼烧，否则培养物容易与残留的液态石蜡一起飞溅。

(3)沙土管法保存的菌种复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次，或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。

(4)真空冷冻干燥法保存的菌种复苏时，先用70%酒精棉花擦拭安瓿管上部，将安瓿管上部在火焰上烧热，用无菌棉签蘸无菌水，在顶部擦一圈，或直接在烧热处滴几滴无菌水，使管壁出现裂纹，放置片刻，让空气从裂缝处慢慢进入管内，然后用锉刀或镊子将裂口端敲断，这样可防止因空气突然冲入安瓿管内使菌粉飞扬。再用少量无菌水或培养液溶解菌块，使干菌粉充分溶解后，用无菌吸管移人新鲜培养基上，置于最适温度下培养。

(5)液氮超低温冻结法保存菌种或-80℃冰箱冻结法保存菌种复苏时，安瓿管或塑料冻存管应立即放置在38～40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动，直到内部结冰全部溶解为止，需50～100s。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

(6)磁珠法保存的菌种复苏时，直接取出1～2个磁珠放入培养皿内晃动，或将磁珠放入液体培养基中培养。