5.2.4.7分析条件的选择

(1)净化样品固相萃取柱的选择

在本方法的研究中，用Oasis HLB固相萃取柱、BUND ELUT C18固相萃取柱、ENVI-18 固相萃取柱、Octadecyl C18固相萃取柱、LiChrolut EN固相萃取柱和Sep-Pak C18固相萃取柱共六种固相萃取柱对6种青霉素的提取效率和净化效果进行了比较。实验发现，Sep-Pak C18固相萃取柱回收率低(只有50%～60%)，且净化效果也不理想，这是该固相萃取柱填料中含碳量小于14%所致。BUND ELUT C18固相萃取柱、ENVI-18 固相萃取柱、LiChrolut EN固相萃取柱和Octadecyl C18固相萃取柱的回收率均好，但样品溶液过柱速度较慢，样品预处理时间长，还存在着不同批次之间回收率的显著差异。而使用Oasis HLB固相萃取柱净化样品回收率较好，净化效果也令人满意，特别适用于本方法。因此本方法选择OasisHLB固相萃取柱净化样品。

(2)提取溶液的选择

分别用去离子水、4%氯化钠溶液和0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液(pH 9.0)作为提取液，完成蜂蜜样品中6种青霉素回收率实验。实验发现，三种提取液的回收率均在78.5%～102.0%范围，回收率数据见表5-29。用去离子水作为提取液对蜂蜜样品进行测定，获得了较好净化效果。用三种提取液制备的蜂蜜基质混合标准溶液测定后，获得的6种青霉素灵敏度无显著差异，同时用去离子水作为提取液还避免了样液中残存的盐对检测仪器造成的不良影响。因此，本方法选择去离子水作为蜂蜜中6种青霉素的提取液。

表5-29 三种提取液对回收率(%)的影响

(3)OasisHLB 固相萃取柱洗脱剂和用量的选择

本方法比较了用乙腈和甲醇作为OasisHLB 固相萃取柱的洗脱剂,对6种青霉素回收率产生的影响。实验发现，用乙腈作洗脱剂，用量在3mL以内，6种青霉素均能从OasisHLB 柱上完全洗脱下来。但重复性不如甲醇好，因此，本方法选用甲醇作为OasisHLB柱的洗脱剂。

分别用0.5～5mL甲醇对6种青霉素完成洗脱条件实验，结果见表5-30。从表5-30可以看出：OasisHLB固相萃取柱用3mL甲醇洗脱6种青霉素的回收率均在90%以上，因此，本方法选用3mL甲醇作为OasisHLB柱的洗脱剂用量。

表5-30 OasisHLB固相萃取柱洗脱剂用量对回收率(%)的影响

(4)液相色谱分析柱的选择

分别对μBondapak C18 300mm×4.0mm色谱柱和SunFire TM 3.5um C18 150mm×2.1mm色谱柱进行了比较。实验发现，这两种色谱柱的灵敏度均能满足要求，但μBondapak C18 300mm×4.0mm色谱柱对邻氯青霉素和乙氧萘青霉素分离度不如SunFire TM 3.5μm C18 150mm×2.1mm色谱柱好，μBondapak C18柱流速在1.5mL/min，进质谱仪之前必须分流，而分流时对6种青霉素结果的测定产生一定误差，而使用SunFire TM 3.5um C18柱不需分流，定量准确度优于μBondapak C18柱，通过以上对两种色谱柱的比较，本方法选用SunFireM 3.5um C18 150mm×2.1mm为6种青霉素的分析柱。