6.2.1.7 分析条件的选择

(1) 提取溶液的选择

根据相关文献资料，从动物组织中提取大环内酯类药物的主要提取溶液有磷酸盐缓冲溶液、0.3%磷酸-甲醇(7+3，v/v)溶液、乙腈、甲醇，对此进行了对比实验，实验结果见表6-5。

表6-5 不同提取溶液的提取效果(%)

从表6-5中数据可以看出，当用磷酸盐缓冲溶液作为提取液时，林可霉素、竹桃霉素、吉他霉素的回收率小于50%；当用0.3%磷酸-甲醇(7+3，v/v)溶液作为提取液时，除克林霉素外，其他8种大环内酯类抗生素的回收率均小于50%；当用甲醇作为提取液时，林可霉素、吉他霉素的回收率小于50%；

当用乙腈作为提取液时，9种大环内酯类抗生素的回收率在64.9%～126.0%范围。所以本方法采用乙腈作为提取液。

(2)样液浓缩对回收率的影响

大环内酯类抗生素大部分对热不稳定，在实验中发现，在55℃水浴中浓缩样液的浓缩程度对回收率的影响很大，结果见表6-6。表6-6数据证明，样液蒸干后，大环内酯类药物的回收率远远低于蒸至近干的回收率。因此，本方法样液浓缩时，蒸至近干为好。

表6-6 不同浓缩程度对回收率(%)的影响

(3)过固相萃取柱时，缓冲溶液对回收率的影响

考虑到过固相萃取柱时，不同缓冲溶液对回收率的影响很大。实验了0.1mol/L磷酸盐缓冲液、0.1mol/L碳酸盐缓冲液、0.2mol/L乙酸盐缓冲液对回收率的影响，对比结果见表6-7。从表6-7数据可以看出，当使用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液过固相萃取柱时，9种大环内酯的回收率均在65%以上，其他两种缓冲溶液的回收率，只有个别品种能达到70%，大部分均在40%以下。因此，本方法选择0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，作为固相萃取柱的缓冲溶液。

表6-7 三种缓冲溶液对回收率的影响(%)

(4)不同pH的缓冲溶液对回收率(%)的影响

在对0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液最佳pH范围进行的选择实验中发现，当pH=8时，9种大环内酯类抗生素的回收率均在50%以上，而其余的pH范围均低于50%。实验结果见表6-8。

表6-8 不同pH值的缓冲溶液对回收率的影响(%)

(5)不同固相萃取柱对回收率的影响

在前述选定条件下，对Varian C18、Oasis HLB和Bakerbondspe C18三种固相萃取柱的萃取效率进行了比较，结果见表6-9。结果表明OasisHLB固相萃取柱的效果最理想。因此，本方法选择OasisHLB固相萃取柱为净化柱。

表6-9 不同固相萃取柱对回收率的影响(%)

(6)洗脱剂用量的选择

根据文献记载，对固相萃取柱洗脱基本采用甲醇，对甲醇的洗脱用量进行了实验，结果见表6-10。结果表明，用15mL甲醇就可以洗脱完全。

表6-10 洗脱剂体积对回收率的影响(%)

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