6.2.2.7 分析条件的选择

(1) 提取溶液的选择

从样品中提取大环内酯类药物的主要提取溶液有0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液、0.1mol/L碳酸氢钠缓冲溶液、0.1molL Tris缓冲溶液，对此进行了对比实验，实验结果见表6-17。

表6-17 不同提取溶液的提取效果(%)

从表6-17中数据可以看出，当用磷酸盐缓冲溶液作为提取液时，红霉素、螺旋霉素、交沙霉素、竹桃霉素的回收率小于80%；当用碳酸氢钠溶液作为提取液时，螺旋霉素的回收率不到70%；而且回收率变化幅度比较大(68.3%～139%)；当用Tris缓冲溶液作为提取液时，回收率在83.5%～115.0%范围，而且回收率相对比较稳定。所以本方法采用0.1mol/L Tris缓冲溶液作为提取溶液。

(2) 不同pH的缓冲溶液对回收率(%)的影响

在对0.1mol/L Tris缓冲溶液最佳pH范围进行的选择实验中发现，当pH在5～11范围内变化时，林可霉素、竹桃霉素、吉他霉素抗生素回收率相对都比较高而且稳定。而红霉素、螺旋霉素、替米考星、交沙霉素、泰乐菌素的回收率变化较大，从42.0%到110.0%，当pH=8～9时，8种药物的回收率均在80%以上，所以本方法选择缓冲溶液的pH=9。实验结果见表6-18。

表6-18 不同pH的缓冲溶液对回收率的影响(%)

(3)不同固相萃取柱对回收率的影响

在前述选定条件下，对OasisMCX(150mg)、Oasis HLB (200mg)和Oasis HLB (500mg)三种固相萃取柱的萃取效率进行了比较。从性能上说Oasis HLB (200mg)和Oasis HLB (500mg)没有区别，但是由于上述两种固相萃取柱的填料粒度不同，Oasis HLB (200mg)粒度为30um，Oasis HLB(500mg)粒度为60um，从而影响样液从固相萃取柱滴下的速度，导致回收率的差异。结果表明OasisHLB (200mg)固相萃取柱的效果最理想。因此，本方法选择Oasis HLB (200mg)固相萃取柱为净化柱。实验结果见表6-19。

表6-19 不同固相萃取柱对回收率的影响(%)