8.2.2.7分析条件的选择

(1)提取方法

在提取样品时，需先用碱处理，使牛奶中酪蛋白钙盐溶解，并降低其吸附力，加入乙醇，使乙醇溶解物溶于其中，加入石油醚可使分层清晰。试验中用乙腈提取后，离心时温度控制在-5℃，可以使试液中的脂肪固化得到更好的离心分层效果。

(2)净化方法

为确定最佳的洗脱范围，在牛奶添加20μg/kg浓度的醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准溶液后，按本方法提取处理后，活化氰丙基固相萃取柱，过柱后，然后分段收集淋洗液、氮吹至干、用1.0mL甲醇定容后进样，得到淋洗曲线图(图8-10)。由图8-10可见，用3mL乙酸乙酯+正己烷溶液(1+4,v/v)可以把醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮淋洗洗脱下来，所以本法淋洗洗脱液乙酸乙酯+正己烷溶液(1+4,v/v)用量定为3.5mL。

图8-10 淋洗曲线图:淋洗体积0～5mL正已烷；

淋洗体积6～11mL乙酸乙酯+正己烷溶液(1+19，v/v)

淋洗体积12～16mL乙酸乙酯+正己烷溶液(1+4，v/v)

8.2.2.8 方法回收率和精密度

在牛奶和奶粉样品中添加醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮，每一添加水平取独立样10个，按上述步骤处理样品，添加水平和回收率结果见表8-16。从表8-16可以看出，牛奶和奶粉样品中添加醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮在四个添加水平的平均回收率在86.5%～91.3%之间，相对标准偏差在4.3%～9.5%之间。

表8-16 牛奶和奶粉样品中添加醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮回收率结果(n=10)