11.2.1.1 适用范围

适用于鳗鱼及制品中15种喹诺酮(氟罗沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、洛美沙星、达氟沙星、奥比沙星、二氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、囈喹酸、萘啶酸、氟甲喹)残留量的液相色谱-串联质谱测定。15种喹诺酮检测低限均为5μg/kg。

11.2.1.2 方法原理

鳗鱼及制品中十五种喹诺酮类药物残留，采用乙腈提取，提取液经正己烷液液分配脱脂后，以强阳离子固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

11.2.1.3 试剂和材料

乙腈、甲醇：色谱纯；正已烷、浓氨水、甲酸、乙酸铵：分析纯。

无水硫酸钠：650℃灼烧4h，冷却后储于密封容器中备用。

氨水+甲醇：25+75。量取25mL氨水，以甲醇定容100mL，混匀。

甲酸溶液：0.1%。移取1mL甲酸，以水定容1L。

乙酸铵缓冲液：10mmol/L。称取0.77g乙酸铵，溶于约700mL水中，以甲酸调节pH=4.6，以水定容1L。

15种喹诺酮类药物标准物质：纯度均≥98%。

标准贮备溶液：100mg/L。准确称取15种喹诺酮类药物标准物质各10.0mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，该标准贮备液置于4℃冰箱中可保存1个月。

标准工作溶液：根据需要取适量标准贮备液，以甲酸溶液+乙腈(9+1，v/v)稀释成适当浓度的混合标准工作溶液。标准工作溶液要现配现用。

强阳离子交换柱(SCX SPE柱)或相当者：500mg，3mL。用前依次以3mL甲醇、3mL水、3mL 10mmol/L乙酸铵缓冲液活化，保持柱体湿润。

11.2.1.4 仪器和设备

液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源；分析天平：感量0.1mg和0.01g；组织捣碎机；旋涡振荡器：分散器：转速应达到10000r/min；超声波发生器；氮气浓缩仪；固相萃取装置；真空泵：真空度应达到80kPa；微量注射器：1～5mL，100～1000μL；离心机：转速应达到4000r/min。

11.2.1.5 样品前处理

(1) 试样制备

鳗鱼去头，将皮、肉分离后先取鱼皮置于微波炉中，以中高功率加热30s后取出切成小块，将鱼肉切成小块，将二者-并放入组织捣碎机均质，充分混匀，装入清洁容器内，并标明标记。鳗鱼制品取可食部分切成小块，放入组织捣碎机均质，充分混匀，装入清洁容器内，并标明标记。制样操作过程中必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。试样于-18℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2～6℃贮存72h。

(2) 提取

称取5g试样(精确至0.01g)置于50mL聚丙烯离心管中，加入约5g无水硫酸钠，25mL乙腈，使用分散器，在10000r/min分散提取30s，4000r/min离心5min，上清液转移至50mL比色管中，另取一50mL离心管加入15mL乙腈，洗涤分散刀头10s，洗涤液移入第-支离心管中，用玻棒搅动残渣，旋涡振荡提取1min，超声波振荡提取5min，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，残渣再加入15mL乙腈，旋涡振荡提取1min，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，乙腈定容至50.0mL。摇匀后移取10.0mL乙腈提取液，以2×5mL正己烷振摇脱脂，使用氮气浓缩仪在35℃下氮吹至近干，加入3mL乙酸铵缓冲液，涡旋振荡30s，待净化。

(3) 净化

将提取步骤所得的溶液以约1mL/min的流速全部过强阳离子固相萃取小柱，抽干，先后以1.5mL甲醇、3mL氨水+甲醇洗脱，合并洗脱液，35℃下氮吹至近干，以甲酸溶液+乙腈(9+1)定容至1mL，过0.22um滤膜，供液相色谱串联质谱分析。

(4) 空白基质溶液的制备

称取阴性样品5g(精确至0.01g)，按上述步骤操作。