12.2.1.6测定

(1)液相色谱条件

色谱柱：InertsilC-3，5μm，150mm×2.1mm(内径)或相当者；流动相：乙腈+甲醇+0.4%甲酸溶液(18+4+78，v/v/v)；流速：0.2mL/min；柱温：25℃；进样量：20μL。

(2)质谱条件

离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：0.055MPa；气帘气压力：0.079MPa；辅助气流速：6L/min；离子源温度：430℃；去簇电压：55V；定性离子对、定量离子对和碰撞气能量见表12-4。

表12-4 四种四环素族抗生素定性离子对、定量离子对和碰撞气能量

(3) 液相色谱-串联质谱测定

用土霉素、四环素、金霉素、强力霉素基质混合标准溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准总离子流图见图12-1。在上述色谱条件下，土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的参考保留时间分别为3.33min、3.89min、8.04min、12.07min。

图12-1 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质总离子流图
3.33min，土霉素；3.89min，四环素：8.04min，金霉素：12.07min，强力霉素